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牛の黄体発育過程におけるLH受容体のスプライシング異型体の発現と機能

牛黄体发育过程中 LH 受体剪接变异体的表达和功能

基本信息

批准号：
09760272
负责人：
川手憲俊
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka Prefecture University (1998)Yamaguchi University (1997)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

牛の黄体における黄体形成ホルモン(LH)受容体mRNAのスプライシング異型体の発現についてRT-PCR法により検討し、さらに準定量的RT-PCR法を用いて黄体発育過程におけるその量的変化について検討した。また牛LH受容体異型体の機能について検討する目的で完全長cDNAのクローニングを行った。RT-PCRによって得られた増幅産物は明瞭な4本のバンドから構成されており、その塩基配列については最長のバンドは全長型(A form)で牛LH受容体cDNAの当該領域の配列と同一であった。残りの3本のバンドは、LH受容体mRNAの異型体であった(F、BおよびG formと命名)。4種のmRNA量は黄体発育過程においてほぼ同様に増加した。また、牛のLH受容体の完全長cDNAのクローニングをRT-PCR法を用いて実施した。RT-PCRは3つの断片に分けて行い、その後3つの断片を制限酵素による切断後、DNAリガーゼによりつなぎ合わせて、4種の完全長cDNA(A,F,BおよびG form)を得た。それらの塩基配列を決定した結果、F formは細胞外のLHと結合する領域の短い部分のみが欠失しており、細胞膜貫通領域および細胞内領域はA formと同一であることがわかった。B formについてはmRNAの一部欠失によるアミノ酸読み枠の移動が起こり、そのため膜貫通領域および細胞内領域を持たない異型体であることが明らかになった。またG formについては、B formの細胞外領域の一部がF formと同様に欠失したものであることがわかった。得られたLH受容体の4種の全長cDNAは哺乳動物発現用のベクターに組み換えて、猿腎臓由来の細胞株に遺伝子導入を行い、その機能について現在解析中である。以上の成績から、牛のLH受容体mRNAのスプライシング異型体は少なくとも3種類存在し(F,BおよびG form)、さらに4種類のmRNA量は黄体発育過程においてほぼ同様に参加することが示唆された。またその3種類の異型体は細胞外領域の一部のみが欠失するもの(F form)、膜貫通領域および細胞内領域が完全に欠損するもの(BおよびG form)であることが明らかになった。

RT-PCR was used to detect and quantify the expression of luteal hormone (LH) receptor mRNA during luteal development. The function of the LH receptor isoform was investigated for the purpose of complete cDNA sequencing. RT-PCR amplification products were found to have the longest cDNA sequence in the four regions, and the full-length cDNA sequence of bovine LH receptor was found to have the same sequence in this region. The isoform of the receptor mRNA of LH is named F, B and G. Four mRNA levels increased during luteal development. The complete cDNA sequence of the LH receptor was successfully performed by RT-PCR. RT-PCR was used to detect 3 fragments, 3 fragments, restriction enzymes, DNA fragments, 4 complete long cDNA fragments (A,F,B and G forms). The result of the base alignment determination is that the F form is the short part of the extracellular LH binding domain and the A form is the same as the cell membrane penetration domain and the intracellular domain. A part of mRNA is missing from the B form, and a part of mRNA is missing from the B form. A part of the extracellular domain of the G form and B form Four full-length cDNAs of the LH receptor have been identified for mammalian development and gene introduction into cell lines derived from simian kidney. These results indicate that there are three types of isoforms (F,B and G forms) and four types of mRNA involved in luteal development. The three types of isoforms are partially defective in the extracellular domain (F form), completely defective in the membrane-penetrating domain (B form) and completely defective in the intracellular domain (G form).