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N-結合型糖鎖修飾のインフルエンザウイルスノイラミニダーゼの高次構造形成への影響

N联糖基化对流感病毒神经氨酸酶高级结构形成的影响

基本信息

批准号：
09760290
负责人：
西藤岳彦
金额：
$ 1.41万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

インフルエンザA型ウイルスの持つ糖蛋白質の感染細胞上への発現に対する糖鎖修飾阻害剤の影響を検討した。実験にはH1型の赤血球凝集素(HA)およびN8型ノイラミニダーゼ(NA)を持つ遺伝子再集合ウイルスNWS-N8を用いた。これまでの研究によって糖鎖の付加を阻害する薬剤であるツニカマイシン処理は、ウイルス感染細胞上でのウイルスHAの発現は影響が低いのに対して、NAの発現が抑制されることが明らかになっている。今回の実験では、糖鎖の修飾阻害剤であるカスタノスペルミン(CST)処理によっても、同様にHAの発現とNAの発現に対する異なった影響が認められた。すなわち、CST処理後のウイルス感染細胞の細胞表面上に発現されるHAおよびNA蛋白質量をそれぞれの蛋白質に特異的な単クローン性抗体を用いたFACS解析によって定量したところ、HA蛋白質の細胞表面での発現量はCST処理によってほとんど影響を受けなかったのに対して、NAの発現量は未処理ウイルス感染細胞の50%にまで減少した。また、感染細胞を用いた間接蛍光抗体法によっても、同様の傾向が観察された。さらに、ウイルス感染細胞をCST処理した後の培養上精中に表れる嬢ウイルス量を定量したところ、CST未処理細胞に比べ、嬢ウイルス産生量が十分の一に減少していることが明らかになった。以上の研究結果によって、インフルエンザウイルスのN8型NAは感染細胞の膜表面への発現にN一結合型糖鎖の修飾が重要な役割を果たしていること、またCST処理によってウイルス産生量が減少することが明らかになった。

To investigate the effects of glycan modification inhibitors on the development of glycoproteins in infected cells The H1-type hemagglutinin (HA) and N8-type hemagglutinin (NA) are used in the reassembly of hemagglutinin NWS-N8. This study was conducted to investigate the effects of sugar lock inhibition on HA production in infected cells. The present invention relates to a method for detecting the presence of HA and NA. The amount of HA and NA protein detected on the cell surface of CST-infected cells after CST treatment was reduced by 50% compared with untreated cells by FACS analysis of protein-specific antibodies. The same tendency was observed in infected cells using indirect fluorescent antibody methods. The amount of CST-infected cells in culture after CST treatment decreased significantly compared with untreated cells. The results showed that N8-type NA was responsible for the expression of N-type carbohydrate on the surface of infected cells, and the expression of N8-type carbohydrate was significantly reduced by CST treatment.