血管内皮細胞の機械刺激受容機構の解明

阐明血管内皮细胞的机械刺激受体机制

• 批准号: 09770025
• 负责人: 成瀬 恵治
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770025/
• 关键词: 機械受容チャネル; カルシウム; BK channel; 情報伝達機構; 機械刺激; クローニング; 血管内皮細胞; 機械受容; チャネル; メカノリセプター

機樋受容リセプターである機械受容チャネルのクローニングを目指した。研究実施計画に従い、いくつかのチャネルの種を通して保存されている領域に対するdegenerate primerを作製し血管内皮細胞および心筋細胞に対してスクリーニングを行った。これまでのところ心筋細胞においてカルシウム依存性・ATP感受性の機械受容チャネルの部分的なシークエンスを確認した。電気生理学的解析:トリ培養心筋細胞には5種類の機械受容チャネルが存在することを確認した。特に、コンダクタンスが200pSの機械受容チャネルについて解析を進めたところ、細胞内カルシウムに感受性を持ちサソリ毒キャリブドトキシンにより阻害される巨大コンダクタンス型カルシウム依存性カリウムチャネル(BK channel)であることが判明した(Am.J.Physiol.印刷中)。分子生物学的解析:上記の機械受容チャネルのクローニングを行った。(1)BK channelの保存領域に対するdegenerate primerを作製た。(2)PCRを行ったところ予想される分子量にPCR産物が増幅された。(3)PCR産物をTAクローニングしシークエンスを行ったところ既知の塩基配列と高い相同性を持つ部分を得ることができた。(4)培養心筋細胞からmRNAを抽出しcDNAライボラリーを作製した。(5)cCDNAライボラリーをλファージベクターに組込んだ。(6)上記配列をプローブとしプラークハイブリダイゼーションを行った。(7)3種類の陽性クローンが取れた。(2)これまで確認されているトリBK channelと高い相同性があることが確認できた。(9)発現ベクターを構築した。(10)パッチクランプにて解析中である。

The machine receives the information from the machine and receives the information from the machine. The study was carried out in the context of the study on the regulation of vascular endothelial cells and cardiac muscle cells by degenerate primers in the field of preservation. This is the first time that we have identified the relationship between ATP sensitivity and mechanical tolerance in the cardiac muscle cells. Analysis of electrical physiology: identification of the existence of five types of mechanoreceptors in cultured cardiac muscle cells In particular, the analysis of the mechanical response to the 200pS mechanical response to the response to the response. Analysis of molecular biology: the mechanical response of the above mentioned problems. (1)BK Degenerate primer for channel preservation (2)PCR products were amplified by PCR. (3)PCR products were obtained from the known nucleotide sequences and highly identical parts. (4)Cultured tendon cells are expressed in mRNA and cDNA. (5) cDNA is the most important component of DNA. (6)On the other hand, it's not a bad idea. (7)3 The species is positive. (2)The identity of the BK channel is confirmed. (9)It's the first time I've seen it. (10)In the analysis of the problem.

项目成果

K.Naruse: "Uni-axial cyclic stretch induces c-src activation and translocation in human endothelial cells via" FEBS Letters. 441. 111-115 (1998)

K.Naruse：“单轴循环拉伸通过”FEBS Letters 诱导人内皮细胞中的 c-src 激活和易位。

K.Naruse: "pp125^<FAK> is required for stretch dependent morphological response of endothelial cells." Oncogene. 17. 455-463 (1998)

K.Naruse：“pp125^<FAK> 是内皮细胞拉伸依赖性形态反应所必需的。”

NARUSE,K.: "Stretih dependint tyrosin phosplxybtin reglation mopphlyat clyc of endothdid alls" Oncosene. (in press). (1998)

NARUSE，K.：“Stretih 依赖酪氨酸磷酸酶调节内托德所有的 mopphlyat clyc”Oncosene。

Sokabe,M.: "Stretch actionted ion channels:Sinjle channel us,whole all report" Projr Cell Res. 6. 139-149 (1997)

Sokabe，M.：“拉伸作用离子通道：我们的单一通道，整个报告”Projr Cell Res。

K.Imaizumi: "Bystander tumoricidal effect lung cancer cell lines without gap junctional communication" Am.J.Resp.Cell.Mol. Biol.18. 205-212 (1998)

K.Imaizumi：“没有间隙连接通讯的旁观者肿瘤杀灭效应肺癌细胞系”Am.J.Resp.Cell.Mol。