機械受容機構の解明―メカノリセプターの分子実体は何か―

阐明机械感受器机制 - 机械感受器的分子实体是什么？

• 批准号: 11670037
• 负责人: 成瀬 恵治
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11670037/
• 关键词: 機械受容チャネル; 血管内皮細胞; 細胞内カルシウム測定法; クローニング; パッチクランプ; トリ心筋; パッチクランプ法

<HUVECのSAチャネルのクローニング>HUVECよりcDNAライボラリーを作成し、発現ベクター(pcDNA3.1)に組込んだ.あらかじめ伸展依存性Caトランジェントがないことを確認したHEK細胞に25グループに分けた上記ライボラリーを遺伝子導入した。伸展可能シリコンチャンバー上に培養した遺伝子導入細胞にカルシウム蛍光色素FURA2を負荷し伸展刺激を与え、カルシウム上昇がある群を選んだ.現在、数群の伸展依存性Caトランジェントを起こすグループを同定した。くトリ心筋SAチャネルのクローニング>培養鶏胚心筋細胞には数種類のSAチャネルが存在する。このうちCa依存性Kチャネルの特徴を備えたSAチャネルがあるので、degenerate primerを作り、PCR産物を得,これを用いて12日鶏胚心筋細胞より得られたファージライボラリーをスクリーニングしたところORFが約3kbpのクローンを得た.これを発現ベクターに組込みCHO細胞に発現させたところ、培養鶏胚心筋細胞にパッチクランプをしたときに観察されたものと同じ性質のSAチャネルを観察する事が出来た。これは既知のイオンチャネルと数アミノ酸の相違があった。現在種々のミューテーションを加える事により機能-構造連関を解析しているところである。

<HUVEC's SA CCL>HUVEC's cDNA CCL is generated and found in pcDNA3.1. The first step is to identify HEK cells that are dependent on stretch. The second step is to identify HEK cells. Stretching may be induced by culture, and the gene is introduced into the cell. The photochrome FURA2 is loaded with stretching stimulation, and the gene is selected from the following groups: Now, the number of stretch dependency Ca ~(3 +) is the same as the number of stretch dependency Ca ~(3 +). There are several kinds of SA cells in cultured embryonic cardiac muscle cells. The characteristics of Ca-dependent K-cell growth were prepared, and the degenerate primer was used. PCR products were obtained from 12-day-old embryonic cardiac muscle cells. This discovery of CHO cells in culture and development of embryonic muscle cells in culture and development of the same properties The number of people who are aware of this problem is not the same as the number of people who are aware of it. Now, we're going to have to do something about it. We're going to have to do something about it.

项目成果

Naruse K: "Aldose reductase inhibition prevents glucose-induced apoptosis in cultured bovine retinal microvascular pericytes"Exp Eye Res. 71. 309-315 (2000)

Naruse K：“醛糖还原酶抑制可防止培养的牛视网膜微血管周细胞中葡萄糖诱导的细胞凋亡”Exp Eye Res。

Yamada T,Naruse K,and Sokabe M: "Stretch-induced morphological changes of human endothelial cells depend on the intracellular level of Ca^<2+> rather than of cAMP"Life Science. (in press). (2000)

Yamada T、Naruse K 和 Sokabe M：“拉伸诱导的人内皮细胞形态变化取决于细胞内 Ca^2 水平，而不是 cAMP”生命科学。

Kawakubo T: "Characterization of a newly found stretch-activated K_<ca,> ATP channel in cultured chick ventricular myocytes"Am. J. Physiol. 276. H1827-H1838 (1999)

Kawakubo T：“培养鸡心室肌细胞中新发现的拉伸激活 K_<ca,> ATP 通道的表征”Am。

Yamada T: "Stretch-induced morphological changes of human endothelial cells depend on the intracellular level of Ca^<2+> rather than of cAMP"Life Sciences. 67. 2605-2613 (2000)

Yamada T：“拉伸诱导的人内皮细胞形态变化取决于细胞内Ca ^ 2 水平，而不是cAMP”生命科学。

Kada K: "Orientation Change of Cardiocytes Induced by Cyclic Stretch Stimulation : Time Dependency and Involvement of Protein Kinases"J. Mol. Cell. Cardio.. 31. 247-259 (1999)

Kada K：“循环拉伸刺激引起的心肌细胞方向变化：时间依赖性和蛋白激酶的参与”J。