心筋症ハムスター心筋膜異常のサルコグリカン機能解析からの解明

通过肌聚糖功能分析阐明心肌病仓鼠心肌异常

• 批准号: 09770036
• 负责人: 岩田 裕子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: National Cardiovascular Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770036/
• 关键词: サルコグリカン; シントロフィン; アクチン; 心筋症; カルモデュリン; ジストロフィン; ジストログリカン; 細胞培養; 骨格筋細胞

アンチセンスDNAを導入してSGを減少させた骨格筋由来の培養細胞を用いた実験系を作成した。サルコグリカン欠損細胞に伸展刺激をくわえるとこれらの欠損細胞は傷害をおこし細胞からクレアチンキナーゼの漏出をおこし心筋症や筋ジストロフィーの病態モデルとして利用できることが明らかとなった。アデノウィルスベクターを用いてBIO14.6ハムスター骨格筋にδ-SG遺伝子を導入したところ、4種すべてのSGが細胞表面膜に正常ハムスター骨格筋と同様に発現しδ-SG遺伝子導入により他のSG欠損が相補できることが明らかになった。さらにα1-syntrophin(Syn)と呼ばれる別のジストロフィン複合体タンパク質の機能についても検討した。synそれ自身がアクチン、カルモデュリンと結合することを明らかにし、それぞれの結合部位を同定した。アクチン結合部位は2ヵ所、PH2ドメインを含む領域(アミノ酸274-315)およびSUドメイン(アミノ酸449-505)でKdはそれそれ0.15PMと0.5ドMであった。カルモデュリン結合部位も2ヵ所あり、カルモデュリンとの親和性が低い(Kd 0.3μM)PHlaドメイン(aa.1-38)と親和性の高い(Kd15nM)PDZドメインの各々がsynのカルモデュリン結合に寄与していることが明らかになった。

The introduction of DNA into the cells reduces the number of cells in culture. Undamaged cells stretch and are damaged. Undamaged cells are damaged. In the case of cell surface membrane, 4 kinds of SG are introduced into the cell surface membrane. In the case of normal cell surface membrane, δ-SG is introduced into the cell surface membrane. In the case of other SG deficiency, δ-SG is introduced. The α1-syntrophin(Syn) complex is a functional complex. Syn is the same as itself in terms of the number of binding sites. The junction position of the two groups is 2 °, PH2 ° and contains the domain (274-315 °). The junction position of the two groups is 0. 15PM and 0. 5 ° M. The affinity of PDZ for the binding site of PDZ was low (Kd 0.3μM) and high (Kd15nM).

项目成果

Tomokazu Yoshida: "B1 directional Signaling between Sarcoglycans and the Integrin Adhesion System in Cultured L6 Myocyles" J.Biol.Chemistry. 273(3). 1583-1590 (1998)

Tomokazu Yoshida：“培养的 L6 肌细胞中肌聚糖和整合素粘附系统之间的 B1 定向信号传导”J.Biol.Chemistry。

Yuko Iwata: "α1-Syntrophin has distinct binding sites for actin and calmodulin" FEBS Letters L. 42.3. 173-177 (1998)

Yuko Iwata：“α1-肌营养蛋白对肌动蛋白和钙调蛋白具有不同的结合位点”FEBS Letters L. 173-177 (1998)。

吉田 智一: "Bidirectional signaling between sarcoglycans and the integrin adhesion system in cultured L6 myocytes" The Journal of Biological Chemistry. 273(3). 1583-1590 (1998)

Tomokazu Yoshida：“培养的 L6 肌细胞中肌聚糖和整合素粘附系统之间的双向信号传导”《生物化学杂志》273(3) (1998)。

吉田智一: "Sarcoglycanのチロシンリン酸化を介するdystrophin複合体とintegrin細胞接着システムとの相互作用" 心筋の構造と代謝. 20. 47-55 (1998)

Tomokazu Yoshida：“肌营养不良蛋白复合物与整合素细胞粘附系统通过肌聚糖酪氨酸磷酸化之间的相互作用”《心肌结构与代谢》20. 47-55 (1998)。

岩田 裕子: "α1-Syntrophin has distinct binding sites for actin and calmodulin" FEBS Letters. 423. 173-177 (1998)

Yuko Iwata：“α1-肌营养蛋白对肌动蛋白和钙调蛋白具有不同的结合位点”FEBS Letters 423. 173-177 (1998)。