ラット初乳に対する単クローン抗体を用いた中枢神経系発達に関する研究

大鼠初乳单克隆抗体对中枢神经系统发育的研究

• 批准号: 09770045
• 负责人: 山室 裕
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770045/
• 关键词: 乳腺; 単クローン抗体; 初乳; ラット

初乳を産生すると考えられる妊娠末期乳腺、特に乳腺上皮細胞質内抗原を認識する単クローン抗体を作製し、その抗体が認識する抗原の分布領域を検索した。さらに、その抗体の中で神経細胞を認識する抗体を確立し、認識抗原の特性を検討した。Wistar系ラットを交配し、妊娠18日目または20日目に灌流、脱血後、乳腺を採取した。0.1%SDSを含むPBSでホモゲネートし、10,000×g、4℃、60分間遠心分離した上清を免疫抗原とした。Balb/cマウスに免疫抗原液を完全アジュバンド、不完全アジュバンド、抗原液のみ、というように数回免疫した後、免疫マウスの抗体価を測定し、抗体価の上昇したマウスの脾臓細胞を無菌的に採取、単離し、脾臓細胞とミエローマ(NS-1)をポリエチレングリコールにより細胞融合した。その後、ELISA法により抗体価を確認しながら単クローン抗体産生細胞(hybridoma)を作出した。この結果、数種類の抗体産生細胞が得られ、泌乳2日目ラットの乳腺凍結切片を用い免疫組織化学により検索し、乳腺上皮細胞内抗原を認識する抗体(MG2E7)を得た。成熟ラット臓器中にMG2E7が認識する抗原をウエスタンブロット法により検索したところ、乳腺の他、大脳皮質、小脳、骨格筋にその存在(分子量約55kDa)が確認された。さらに、ラット新生仔神経細胞初代培養系を用い、neuron specific enolaseとMG2E7を併用し免疫細胞化学を行なったところ、同一細胞種(neuron)を認識し、グリア細胞にその発現は認められなかった。また、アイソタイピングにより、MG2E7はIgM(κ)であることが確認された。以上の事から、乳腺上皮細胞(乳汁)由来の物質が乳仔発育期の中枢神経系(neuron)に対し重要な影響を及ぼしている可能性が示唆された。また、今回得られたMG2E7の特性から、中枢神経系の発達のみならず高次脳機能に関する研究においても有用と考えられる。

In colostrum, the intracellular antigens of breast epithelium at the end of pregnancy, the intracellular antigens of breast epithelium, the antibodies of colostrum, the distribution of antigens and the distribution of antigens in colostrum were detected. In the antibodies and antibodies, the cells recognize the antibodies and the characteristics of the antigens. Wistar was mating in pregnancy, perfused on the 18th and 20th day of pregnancy, and was removed from the breast after blood loss. 0.1%SDS contained immunological antigen in the supernatant of PBS isolates, 10000 × g, 4 ℃ and 60 minutes. After several times of immunization, the immune antigen fluid of Balb/c antigens was completely purified, incomplete immunized, immunized, immunized and immunized for several times. The antibodies were tested, the antibodies were isolated, the spleen cells were isolated, and the cells were fused. After that, ELISA method was used to confirm that the antibody producing cell (hybridoma) was detected. The results showed that several kinds of antibodies were successfully detected, the breast tissue sections were detected by immunohistochemical staining, and the breast epithelial intracellular antigen recognition antibodies (MG2E7) were detected. In the mature MG2E7 device, there are antigens, breast cancer, breast cancer, breast cancer, The primary cell culture of newborn baby was used, and the immunocytochemistry of neuron specific enolase MG2E7 cell was used to detect the identity of the same cell species (neuron) and the cell culture of the same cell species. Please confirm that you have not received any information from others, such as MG2E7, IgM (κ), etc. The above facts, breast epithelial cells (milk) are derived from the fact that the central nervous system (neuron) is important during the childbearing period and the possibility of breast cancer. This time, we have obtained a lot of information about the characteristics of MG2E7, and the central god system has reached the level of high-speed aircraft. it is very useful for research and research.

项目成果

Yamamuro Y, Sensui N.: "Exogenous oxytocin attenuates suckling-induced prolactin release but not maternal or infant behavior in lactating rats" Physiol.Behav.63. 939-943 (1998)

Yamamuro Y，Sensui N.：“外源性催产素会减弱哺乳诱导的催乳素释放，但不会减弱哺乳大鼠的母体或婴儿行为”Physiol.Behav.63。

Yamamuro Y, et al.: "Developmental profile of prolactin cells in the anterior pituitary of postnatal rats during the lactational stage" Proc.Soc.Exp.Biol.Med.220. 94-99 (1999)

Yamamuro Y 等人：“哺乳期产后大鼠垂体前叶催乳素细胞的发育概况”Proc.Soc.Exp.Biol.Med.220。

Yamamuro.Y and Sensui N: "Exogenous Oxytocin Attenuates Suckling-induced Prolaction Release but Not Maternal or Infant Behavior in Lactating Rats." Physiology&Behavior. (in press). (1998)

Yamamuro.Y 和 Sensui N：“外源性催产素会减弱哺乳诱导的泌乳释放，但不会减弱哺乳期大鼠的母体或婴儿行为。”