アンチセンス法を用いた脊髄痛覚伝達・増強機構に関与するG蛋白質の解析

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本年度も引き読き成熟ラット及び新生ラットにおける様々な即時痛・慢性痛モデルに対する各種G蛋白質αサブユニット(Gα)アンチセンス及びセンスオリゴデオキシヌクレオチド(アンチセンス:AS;センス:S)の効果を検討した。成熟ラットにおいては様々な即時痛刺激(機械、熱、化学的刺激)に対し、Gα(Gα_q、Gα_<ll>、Gα_o、Gα_<i-1>、Gα_<i-2>、Gα_<i-3>)AS並びにSはほとんど効果がなかった。炎症性疼痛モデルとしてはホルマリンテストの第2相反応を指標に用い、Gα_q及びGα_<ll>ASの効果を検討したところ、Gα_qASは第2相反応を有意に抑制したが、Gα_<ll>ASはほとんど効果を示さなかった。両者のSは共に効果を示さなかった。神怪因性疼痛モデルとしては坐骨神経絞扼神経損傷モデルを用いた。神経損傷により誘発される熱性痛覚過敏及び機械的異痛現象発現の時間経過はGα_oASにより有意に延長されるが、Sは効果を示さないことが示唆された。一方Tail flick法を用いて観察されるモルヒネの鎮痛効果に対するGα_i及びGα_oASの効果を検討したところ、Gα_<i-l>ASは有意にモルヒネの鎮痛効果を抑制したが、Gα_oASはほとんど効果を示さず、マウスにおける報告とは異なる結果を得た。上記のASの効果は蛋白質発現減少を伴っていることをウニスタンブロット法にて確認した。以上の結果に関して現在論文作成中である。新生ラットにおいては強度電気刺激により誘発される脊髄多シナプス伝達を抑制する神経伝達物質(GABA、オピオイド)に対するGα_iAS及びSの効果を検討した。ASあるいはSを髄腔内に投与して2日後脊髄を摘出し実験を行った。その結果Gα_<i-l>ASはオピオイド(エンケファリン、エンドモルフィン)の濃度依存性抑制効果を減弱させたが、GABA_B作用薬バクロフェンの効果に対しては影響しなかった。Gα_<i-2>及びGα_<i-3>については現在検討中である。