細胞融合制御因子(FRP-1)リガンドの同定及びFRP介在の細胞融合機構の解明

细胞融合调节因子（FRP-1）配体的鉴定及FRP介导的细胞融合机制的阐明

• 批准号: 09770204
• 负责人: 河野 光雄
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770204/
• 关键词: Fusion Regulatory Protein; FRP; 細胞融合; 巨細胞; CD98; 4F2; リガンド

本研究では、細胞接着因子としての機能を有し、細胞融合制御システムの一部として存在するFusion Regulatory Protein(FRP-1)に対するリガンドの同定を目的に研究を行った。昨年度の研究でリガンド検索のプローブトして作製したsoluble FRP-1(sFRP)の大量精製のためセンダイウイルスベクター(東大医科研、永井教授より分与)を用いて、発育鶏卵の漿尿液からのsFRP-1の回収及び精製を、それと並行してLac switchを用いたsFRP-1誘導発現細胞の培養上清からの精製をアフィニティーカラムを用いて行った。このプローブを用いてリガンドのdistributionを検索した結果、HsOs-1及びGCT細胞に多く発現しており、これらの細胞からcDNAライブラリーを作製した。HsOs-1細胞からのcDNAライブラリーは、mix primer(n=20)を用いたRT-PCR法によりcDNAを作製し、SurfZAPベクターを用いたPhage display(バイオパンニング)によるスクリーニングに、また、GCT細胞からのcDNAはoligo dTおよびrandom primerを用いたGubuler-Hoffman法により作製し、発現ベクター(SRα296)に挿入し、COS細胞を用いたパンニングに使用した。現在までのところ、これらのスクリーニング結果からのリガンドの同定にはいたっていない。さらにスクリーニングを繰り返し、また、新たにFACScansortingによるスクリーニングを導入してリガンドの同定を遂行したい。

This study で は, cell factor then と し て の function を し, cell Fusion suppression シ ス テ ム の a と し て exist す る Fusion Regulatory Protein (FRP) に す seaborne る リ ガ ン ド の set purpose を に research を row っ た. Last year 's <s:1> research でリガ でリガ ド検 ド検 requested <s:1> プロ ブト て て て て to produce <s:1> たsoluble FRP - 1 (sFRP) の lots of refined の た め セ ン ダ イ ウ イ ル ス ベ ク タ ー (neusoft medical research, professor yong well よ り points with) を with い て, 発 鶏 eggs の plasma urine か ら の の 収 back and sFRP - 1 び refined を, そ れ と parallel し て Lac Induction switch を with い た sFRP - 1 発 の is cell culture supernatant か ら の refined を ア フ ィ ニ テ ィ ー カ ラ ム を with い て line っ た. こ の プ ロ ー ブ を with い て リ ガ ン ド の distribution を 検 cable し た results, HsOs - 1 and び GCT cells more than に く 発 now し て お り, こ れ ら の cells か ら cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を cropping し た. HsOs - 1 cell か ら の cDNA ラ イ ブ ラ リ ー は, mix primer (n = 20) を い た rt-pcr method に よ り cDNA を as し, SurfZAP ベ ク タ ー を with い た Phage The display (バ イ オ パ ン ニ ン グ) に よ る ス ク リ ー ニ ン グ に, ま た, GCT cells か ら の cDNA は oligo dT お よ び random Primer を with い た Gubuler Hoffman method に よ り as し, 発 now ベ ク タ ー (296) SR alpha に scions into し, COS cell を い た パ ン ニ ン グ に use し た. Now ま で の と こ ろ, こ れ ら の ス ク リ ー ニ ン グ results か ら の リ ガ ン ド の with fixed に は い た っ て い な い. さ ら に ス ク リ ー ニ ン グ を Qiao り return し, ま た, new た に FACScansorting に よ る ス ク リ ー ニ ン グ を import し て リ ガ ン ド の with fixed を carries out し た い.

项目成果

Kousuke Okamoto: "An anti-fusion regulatory protein-1 monoclonal antibody suppresses human parainfluenza virus type 2-induced cell fusion." Journal of General Virology. Vol.78. 83-89 (1997)

Kousuke Okamoto：“一种抗融合调节蛋白 1 单克隆抗体可抑制人副流感病毒 2 型诱导的细胞融合。”

Machiko Nishio: "Human parainfluenza virus type 2 phosphoprotein: Mapping of monoclonal antibody epitopes and location of the multimerization domain." Journal of General Virology. Vol.78. 1303-1308 (1997)

Machiko Nishio：“人类副流感病毒 2 型磷蛋白：单克隆抗体表位的映射和多聚化结构域的位置。”

Kousuke Okamoto: "Paramyxovirus-Induced Syncytium cell formation is suppressed by a dominant negative fusion regulatory protein-1(FRP-1)/CD98 mutated construct." Journal of General Virology. Vol.78. 775-783 (1997)

Kousuke Okamoto：“副粘病毒诱导的合胞体细胞形成受到显性失活融合调节蛋白-1 (FRP-1)/CD98 突变结构的抑制。”

Kousuke Okamoto: "Enhancement of human parainfluenza virus-induced cell fusion by pradimicin, a low molecular weight mannose-binding antibiotic." Medical Microbiology and Immunology. Vol.186. 101-108 (1997)

Kousuke Okamoto：“pradimicin（一种低分子量甘露糖结合抗生素）增强人副流感病毒诱导的细胞融合。”

Morihiro Ito: "Role of a single amino acid at the amino terminus of the simian virus 5 F2 subunit in syncytium formation." Journal of Virology. Vol.71. 9855-9858 (1997)

Morihiro Ito：“猿病毒 5 F2 亚基氨基末端的单个氨基酸在合胞体形成中的作用。”