パラインフルエンザ2型ウイルスゲノム操作によるウイルス学的展開

通过副流感 2 型病毒基因组操作进行病毒学开发

• 批准号: 12770153
• 负责人: 河野 光雄
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770153/
• 关键词: rPIV2; rPIV2V(-); rPIV2(ΔM); リバースジェネティクス; ウイルスベクター; ワクチン

前年度に確立したリバースジェネティクスを用いてリコンビナントパラインフルエンザ2型ウイルス(rPIV2)とV蛋白特異的領域(約60アミノ酸)を欠損させたウイルス[rPIV2V(-)]を作製し、これらのウイルスの性状を比較した。野生株様のrPIV2は、インターフェロン(IFN)シグナリングにおけるSTAT2のプロテオソームディグラデーションもしくは蛋白の翻訳阻害によりIFNに抵抗性を示したが、一方rPIV2V(-)はIFNに対して高い感受性を示した。このことからV蛋白のカルボキシ末端に位置するその特異的領域がIFNシグナリング阻害に非常に重要な領域であることが示唆された。また、Vero細胞を用いての感染実験において、感染細胞内でのウイルスmRNA及び蛋白合成量は両者間でほとんど差はみられなかったが、その培養上清中にリリースされたrPIV2V(-)粒子数は100〜200倍減少した。さらに、免疫電顕により確認されたrPIV2V(-)Virionの径は有意に大きくなっており、V蛋白のその領域はウイルス粒子のassemblyにも関与していることが示唆された。また、本年度はワクチン化及びウイルスベクター化に向けてT7ポリメラーゼの供給源としてワクシニアウイルスを用いない系を確立し、M蛋白のカルボキシ末端119アミノ酸を欠損させたウイルス(rPIV2ΔM119)を作製しM蛋白の機能について調べた。rPIV2ΔM119は、培養上清中へリリースされるVirionの数が著しく減少し、その値は先に示したrPIV2V(-)よりも10倍程度低かった。さらにrPIV2ΔM119感染細胞に、M蛋白発現細胞を加えて供培養することにより、リリースされるVirion量が10倍程度増加した。これらの結果からM蛋白がVirionのassemblyおよびBuddingに関与していることが示唆された。

In the previous year, it was established that there was a lack of damage to the V protein specific domain (about 60 ° C), and the characteristics of the V protein were compared. Wild strains of rPIV2, rPIV 2 (-), rPIV (-), rPIV This is a very important domain for IFN gene protection. In Vero cells, the number of rPIV2V(-) particles in culture supernatant decreased by 100 - 200 fold. In addition, the immune response of rPIV2V(-)Virion was confirmed. This year, we have established the supply source and use system of M-protein in T7 protein, and the function of M-protein in rPIV2 ΔM119 is regulated. rPIV2ΔM119 is 10-fold lower than that of rPIV2V(-). The amount of Virion in rPIV2 ΔM119-infected cells and M-protein-producing cells increased tenfold in culture. The result is that M protein is associated with Virion assembly and Budding.

项目成果

Miyamoto et al.: "Induction of c-Src in human blood monocytes by anti-CD98/FRP-1 mAb in an Sp1-dependent fashion."Cell Immunol.. 204(2). 105-113 (2000)

Miyamoto 等人：“抗 CD98/FRP-1 mAb 以 Sp1 依赖性方式诱导人血单核细胞中的 c-Src”。《细胞免疫学》204(2)。

Nishio M.et al.: "High resistance of human parainfluenza type 2 virus protein-expressing cells to the antiviral and anti-cell proliferative activities of alpha/beta interferons:cysteine-rich V-specific domain is required for high resistance to the interfe

Nishio M.等人：“人类副流感2型病毒蛋白表达细胞对α/β干扰素的抗病毒和抗细胞增殖活性具有高抵抗力：富含半胱氨酸的V特异性结构域是对干扰素的高抵抗力所必需的。

Komada et al.: "N-glycosylation contributes to the limited cross-reactivity between hemagglutininn euraminidase proteins of human parainfluenza virus type 4A and 4B."Med Microbiol Immunol.. 189(1). 1-6 (2000)

Komada 等人：“N-糖基化导致人副流感病毒 4A 型和 4B 型血凝素胞嘧啶核苷酶蛋白之间的有限交叉反应性。”Med Microbiol Immunol.. 189(1)。

Miyamoto et al.: "Spindle-shaped cells derived from giant-cell tumor of bone support differentiation of blood monocytes to osteoclast-like cells."J Orthop Res.. 18(4). 647-654 (2000)

Miyamoto 等人：“源自骨巨细胞瘤的纺锤形细胞支持血液单核细胞向破骨细胞样细胞的分化。”J Orthop Res.. 18(4)。

Komada et al.: "Incomplete replication of human parainfluenza virus type 4 in LLC-MK2 cells and in L929 cells."Med Microbiol Immunol.. 188(4). 185-189 (2000)

Komada 等人：“人副流感病毒 4 型在 LLC-MK2 细胞和 L929 细胞中的复制不完全。”Med Microbiol Immunol.. 188(4)。