ジストロフィン遺伝子の発現調節機構の異常とその病態の解析

肌营养不良蛋白基因表达调控异常机制及其病理生理分析

• 批准号: 09770554
• 负责人: 木村 重美
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770554/
• 关键词: dystrophin; プロモーター; エンハンサー; lacZ; トランスジェニックマウス; 発現; MEF-2; M-CAT

1.DNAモチーフ解析筋型エクソン1の上流7008bpの領域には心筋・骨格筋・平滑筋に関連するcis-acting elementsとしてE-boxが32カ所、MEF-2とTREが2カ所ずつ、M-CATとCArG boxがそれぞれ1カ所ずつ見つかった。そのほかsilencer binding siteが2カ所見つかった。2.dystrophin promoter-lacZの培養細胞への導入・発現解析11種類のコンストラクトを作製し、リボフェクションによってC2/4 myoblastに導入し、myotubeでの発現を調べたところ7kbのイントロン1内にエンハンサー活性が認められた。3.トランスジェニックマウスの発現解析7kbのプロモーター領域にlacZ遺伝子をつなぎ、さらにエンハンサーとして7kbのイントロン1をつけたtransgeneを使ってトランスジェニックマウスを作製してX-gal染色によってlacZ遺伝子の発現を調べたところ、embryoでは骨格筋・心筋共に強い発現が見られたが、adultでは骨格筋の発現が著明に減弱していた。また血管平滑筋にもembryoからadultになるまで発現が見られた。本実験においてadultマウスの骨格筋に1acZの発現が非常に弱かった理由としては2つ考えられる。lつめは使われたtransgeneの中には骨格筋での発現に関与するエンハンサーが完全な形では含まれていないということ、2つめはこれまでに発見されていないadult骨格筋型エクソン1およぴプロモーターが別の部位に存在する可能性があるということである。

1. DNA analysis of the 7008bp domain of the tendon type: Cis-acting elements: E-box: 32; MEF-2: TRE: 2; M-CAT: CARG box: 1.そのほかsilencer binding siteが2カ所见つかった。2. Analysis of 11 kinds of protein expression in cultured cells of dystrophin promoter-lacZ: control, regulation, expression, and expression of C2/4 myoblast. 3. 7kb of lacZ gene expression in the field of X-gal staining, 7kb of lacZ gene expression in the field of X-gal staining, The blood vessels are smooth and smooth. This is a very weak reason for the emergence of adult muscle. 1. The possibility of the occurrence of the bone lattice in the middle of the transgene and the possibility of the occurrence of the bone lattice in the middle of the transgene and the possibility of the occurrence of the bone lattice in the middle of the transgene.

项目成果

木村重美: "A 900 bp gennomic region from mouse dystrophin promoter directs lacZ reporter expression only to the right heart of transgenic mice." Dvelopment Growth & Differentiation. 39(3). 257-265 (1997)

Shigemi Kimura：“来自小鼠肌营养不良蛋白启动子的 900 bp 基因组区域仅将 lacZ 报告基因表达引导至转基因小鼠的右心。”39(3) (1997)。

木村重美: "Muscle type promoter and its first intoron abnormalities in dystrophin gene in patients with Purchenne muscular dystrophy." Journal of Child Neurology. (in press).

Shigemi Kimura：“普氏肌营养不良症患者的肌营养不良蛋白基因中的肌肉类型启动子及其第一个内含子异常。”《儿童神经病学杂志》。

木村重美: "2.1 kb5'-flauking region of the brain type dystrophin gene directs the expression of lacz in the cerebreil cortex, but in the hippocampus" Journal of the Neurdogical Sciences. 147(1). 257-265 (1997)

Shigemi Kimura：“脑型抗肌营养不良蛋白基因的 2.1 kb5-flaking 区域指导 lacz 在小脑皮质中的表达，但在海马体中”，Journal of the Neurodogical Sciences 147(1) 257-265 (1997)。