小児うっ血性心不全に対する新たなる治療法開発に関する基礎的研究-β2-アドレナリン受容体cDNAの心筋細胞内への導入-

小儿充血性心力衰竭新疗法开发的基础研究 - 将β2-肾上腺素受体 cDNA 导入心肌细胞 -

• 批准号: 09770580
• 负责人: 布山 裕一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770580/
• 关键词: うっ血性心不全; アドレナリン受容体; 遺伝子治療; 心筋細胞

小児のうっ血性心不全に対しては多くの薬剤が開発されている。しかし、長期にわたる薬物投与は多くの副作用と同時に薬剤に対する心筋の反応性低下をもたらし、ついには小児科的治療の限界を向かえる。本研究では、心筋細胞内に特異的にβ-アドレナリン受容体を過剰発現させることで受容体の2量体形成を促進し、これによりカテコラミンアゴニストの投与なしで心筋の収縮力を増強させ、うっ血性心不全の治療がができるのではないかとの着想のもと研究を計画した。研究成果:1.小児うっ血性心不全の心筋細胞おけるβ2-アドレナリン受容体の発現検討: 臨床的に長期にわたるうっ血性心不全を呈した小児の剖検例につき、心臓各部での心筋のアドレナリン受容体の発現をヒト抗β1-および抗β_2-AR抗体を用いた間接蛍光抗体法にて染色し、その発現を対照(明らかなうっ血性心不全の認められなかった小児例)と比較検討した。間接螢光抗体法のでは両者に明かな差は認められなかった。2.培養心筋細胞へのβ2-AR cDNAの遺伝子導入:ヒトβ-ARの心筋特異的発現を行うため、ヒトβ_2-AR cDNAとレポーターとしてのβ-galactosidase遺伝子をα-ミオシン重鎖(α-MHC)の5'上流プロモーター領域に接合した融合遺伝子を作成した。これを発現ベクターに組み込んだ後、マウスの培養心筋芽細胞株C2C12内へ導入。この際、遺伝子導入株選別のためpSV2-neoを同時にトランスフェクションした。トランスフェクタントはネオマイシン存在下で2週間培養の後、β_2-ARの発現をノーザン、ウエスタンブロットにてスクリーニングし、クローン株選別を試みたが、β_2-ARを過剰発現するクローンが得られなかった。現在、トランスフェクションの方法を変えて同様の実験を継続するとともに、β_2-ARをtransientトランンスフェクショした際に、培養心筋細胞の機能が変化しうるか否かを検討している。

Minor 児 うっ hemorrhagic heart failure に to <s:1> て excessive く <s:1> drugs が to develop されて されて る る る. し か し, long-term に わ た る 薬 objects cast and は く と の side effects at the same time に 薬 tonic に す seaborne る heart muscle の anti 応 low sexual を も た ら し, つ い に は treating where families の limit を to か え る. This study で は, heart muscle cells に specific に beta ア ド レ ナ リ ン by ever let body を turning 発 now さ せ る こ と で の 2 quantity body by let body formation を promote し, こ れ に よ り カ テ コ ラ ミ ン ア ゴ ニ ス ト の cast with な し で heart muscle の 収 shrinkage force を raised strong さ せ, う っ hemorrhagic heart insufficiency の treatment が が で き る の で は な い か と think の の も し を と research projects Youdaoplaceholder0. Research findings :1. Occurrence of おけるβ2-アドレナリ おける receptor masses in small 児うっ hemorrhagic heart failure specimens Clinical に long-term に わ た る う っ hemorrhagic heart insufficiency を show し た small where の cutting 検 example に つ き is crucial, the heart by で の heart muscle の ア ド レ ナ リ ン by let body の 発 now を ヒ ト beta 1 - resistant お よ び beta _2 - AR antibody を resistance with い た 蛍 indirect light antibody technique に て dyeing し, そ の 発 を now as seaborne (Ming ら か な う っ hemorrhagic heart insufficiency の recognize め ら れ な か っ た) where a case Youdaoplaceholder0 compares 検 for た. The indirect fluorescent antibody method <s:1> で で the two に clearly に な differently に recognize められな められな った った. 2. Develop the heart muscle cells へ の beta 2 - AR cDNA の posthumous son 伝 import: ヒ ト beta AR の heart muscle specific 発 を now done う た め, ヒ ト beta _2 - AR CDNA と レ ポ ー タ ー と し て の beta - galactosidase posthumous son 伝 を alpha ミ オ シ ン heavy lock (alpha MHC) の 5 'upstream プ ロ モ ー タ に ー field joint し た fusion heritage 伝 son を made し た. After the み込んだ れを れを group み込んだ was formed, the <s:1> ウス タ タ に に cell line C2C12 was introduced in へ. <s:1> <s:1> interplant and interplant 伝 subplants are introduced to select <s:1> ためpSV2-neoを at the same time にトラ <e:1> スフェ ショ ショ た た. ト ラ ン ス フ ェ ク タ ン ト は ネ オ マ イ シ ン で 2 weeks training in the presence of の, beta _2 - AR の 発 now を ノ ー ザ ン, ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト に て ス ク リ ー ニ ン グ し, ク ロ ー ン ZhuXuan don't try を み た が, beta _2 - AR を turning 発 now す る ク ロ ー ン が must ら れ な か っ た. Now, ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン の way を - え て with others の be 験 を 継 続 す る と と も に, beta _2 - AR を transient ト ラ ン ン ス フ ェ ク シ ョ し た interstate に, cultivating function of heart muscle cells の が variations change し う る か no か を beg し 検 て い る.