神経栄養因子/受容体カスケードの活性化による周産期脳障害の治療に関する基礎的研究

激活神经营养因子/受体级联治疗围产期脑部疾病的基础研究

• 批准号: 09770573
• 负责人: 今井 祐之
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770573/
• 关键词: 神経栄養因子; 神経成長因子受容体; 神経可塑性; 脳障害; 周産期脳障害; 遺伝子治療; 神経成長因子

in vivoで神経細胞内に機能的NGF/NGFRカスケードを人為的に過剰発現させることによって、その神経細胞があらゆる神経栄養因子に対して反応性(分化・成長・維持)を獲得し、傷害を受けた神経細胞の可塑性引き引き出せるのではないかとの仮説のもと研究を計画した。具体的には1.神経親和性を有するベクターを用いてin vitroでのNGF/NGFRカスケードによる未分化神経細胞の分化誘導を検討する。2.神経傷害動物モデルを用いた、in vivoにおける神経修復機構へ及ぼすNGF/NGFRカスケードの有用性に関し検討する。研究成果:1.神経成長因子受容体(trkA)cDNAの細胞内導入:trkAcDNAを組み込んだ発現ベクターが、in vitroにおいてtrkA蛋白を細胞表面上に発現するか否かを検討するため、ヒト神経細胞芽腫株HTLA230に発現ベクターを導入した。発現細胞には140KDaのTrkA蛋白が発現し、間接蛍光抗体法によるFACS解析では約60%の細胞が細胞表面上にTrkAを発現した。2.TrkA発現神経細胞のNGF応答性:発現したTrkA蛋白が機能的NGFRとして作用するか否かを検討した。トランスフェクタントはNGF短時間処置した後、immediate-early responseとしてのc-fosの一過性の発現誘導を、またNGF長期投与に伴うlate responseとして形態学的分化を示した。3.in vivo:ヌードマウスの一例側腹部皮下にtrkAcDNAをあらかじめ遺伝子導入した未分化神経細胞を移植した後、反対側側腹部皮下にNGFを連続投与した。未分化神経細胞は成熟神経細胞への形態学的分化をとげ、各種の成熟神経細胞マーカーを発現した。このことは人為的に発現したNGF/TrkAカスケードがin vivoにおいても機能的であることを意味する。4.障害修復:現在、一側大脳半球に物理的障害を加えたマウスに、NGFを脳室内投与した際に障害の修復過程に如何なる変化がみられるかを検討している。

In vivo, NGF/NGFR gene expression in neurons is related to the development of human neurotrophic factors in neurons, including the acquisition, injury, and plasticity of neurons. Specifically, 1. Neurocompatibility is a key factor in the induction of differentiation of undifferentiated neurons in vitro. 2. Neurological injury in animals, in vivo, neurorepair mechanisms, and NGF/NGFR research on usefulness Research Results:1. Intracellular introduction of receptor for growth factor (trkA)cDNA:trkAcDNA was developed in vitro and trkA protein was developed on cell surface. TrkA protein of 140KDa was found in developing cells, and TrkA was found on the surface of approximately 60% of cells by FACS analysis using indirect fluorescent antibody. 2. TrkA Expression of NGF Response in Neurons: The role of TrkA protein in NGF response is discussed. The expression of c-fos was induced by NGF in a short time, and the expression of c-fos was induced by NGF in a long time, which was accompanied by a late response. 3.in vivo: One case of subcutaneous transplants in the flank, NGF injection into the opposite flank The morphological differentiation of undifferentiated neurons from mature neurons and the development of various mature neurons This is an artificial expression of NGF/TrkA. 4. Damage repair: Now, one side of the hemisphere physical damage, NGF, indoor and international damage repair process, how to change, change