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X連鎖性網膜色素変性症の原因遺伝子mRNAの破壊による網膜色素上皮細胞への影響

由于导致 X 连锁色素性视网膜炎的基因 mRNA 被破坏而对视网膜色素上皮细胞产生影响

基本信息

批准号：
09771484
负责人：
松島正史
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

X連鎖性網膜色素変性症の原因遺伝子がクローニングされた(RPGR Nature genetics 13,35-42,1996)。RPGRは細胞分裂の促進、RNAプロセッシングなどを行う低分子量GTPaseの制御因子と高い類似性があり、細胞増殖などへの関与が議論されているがその欠損による網膜色素上皮細胞の特異的な変性の理由は全く不明である。in vitroの細胞培養系を用いてRPGRのmRNAを特異的に破壊して網膜色素上皮細胞の諸機能への影響を明らかにする目的で以下の実験を行った。前年度にヒトRPGRのcDNA断片のクローニングを行い、それをプローブとしてヒト網膜色素上皮細胞株から抽出したRNAに対してRT-PCRとサザン・ハイブリダイゼーションを行い、RPGRの発現を確認した。ヒト網膜色素上皮細胞株へのRPGRアンチセンスオリゴヌクレオチドの導入1. 前年度にRPGRの発現を確認したヒト網膜色素上皮細胞の株細胞を用いて、培養液中にアンチセンスオリゴヌクレオチド(3A:AATACACTTggTgACTgTgA)を添加して導入した。2. アンチセンスオリゴヌクレオチドを導入した細胞の形態を観察したが、変化はみられなかった。3. アンチセンスオリゴヌクレオチドを導入した細胞でDNA合成能への影響をみるため、トリチウム標識したチミジンの取り込み実験を行ったが変化はなかった。アンチセンストリゴヌクレオチドを培養液中に添加して、ヒト培養網膜色素上皮細胞のRPGRmRNAの阻害による影響をみた。アンチセンスオリゴヌクレオチドの導入効率が低かった可能性も考えられるが、RPGRのアンチセンスオリゴヌクレオチドによる阻害では、ヒト培養網膜色素上皮細胞の細胞形態の維持、DNA合成能に影響はなかった。

The cause of X-linked retinitis pigmentosa (RPGR Nature genetics 13, 35-42). RPGR cell mitosis promotion, RNA cell mitosis promotion, low molecular weight GTPase control factor, high similarity factor, cell growth factor, cell mitosis, cell mitosis, low molecular weight, low molecular weight, high The in vitro cell culture system uses the RPGR mRNA special broken membrane pigment epithelium cell culture machine to make sure that the following information is available. In the previous year, the RPGR cDNA fragments were detected, and the RT-PCR cell line was extracted from the membrane pigment epithelium cell line. The RT-PCR cell line was extracted from the membrane pigment epithelium cell line, and the RPGR cell line was confirmed. The cell line of membrane pigment epithelium, RPGR, pigment epithelium, pigment epithelium, pigment In the previous year, RPGR made sure that the cell line of Reticular pigment epithelium cell was added to the cell line. The cell was added to the culture solution, and the 3A:AATACACTTggTgACTgTgA was added to the cell culture solution. two。 Please check the shape of the cell, observe the shape of the cell and change the shape of the cell. 3. This is the first time that the DNA synthesis has been completed. This is the first time that the data has been collected. In the culture solution, the RPGRmRNA of the pigment epithelium of the network was added to the culture solution to prevent the damage. The rate of entry is low. The possibility of DNA synthesis is low. The results show that there are significant differences in cell morphology, cell morphology, DNA synthesis and so on.