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破骨細胞誘導系においてMi転写因子と結合する分子の検索

寻找破骨细胞诱导系统中与 Mi 转录因子结合的分子

基本信息

批准号：
09771532
负责人：
川口奈奈子
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771532/
关键词：
microphthalmia mi mitf osteoclast differentiation

项目摘要

mi/mi変異マウスにおいて骨大理石病がみられることが知られている。破骨細胞形成不全によるものといわれており、我々は破骨細胞形成におけるmitfの役割を検討している。正常動物(ddy)の骨髄細胞をビタミンD存在下で培養すると培養した細胞中に多核の破骨細胞様細胞が形成されることが知られており、この系を用いて、まず破骨細胞形成におけるMitfの発現を検討している。mitfの抗体をC端15アミノ酸残基に対して作成した。この部位は、BLASTP、FASTAPで検索した結果mitf以外検出できなかったが、positive controlのB16メラノーマ細胞でも、negative controlのNIH3T3細胞でも核が特異的に染色された。全長のmitfに対する抗体を用いて、同様の実験を行った結果、B16メラノーマ細胞ではpositiveであり、NIH3T3細胞ではnegativeで、ノーザンブロットの結果と一致した結果であった。このことは、mitfのC端15アミノ酸残基に非常によく似た核内蛋白質が存在する可能性を示唆するとともに、全長のmitfに対する抗体はmitfに特異的であることを示している。現在この全長のmitfに対する抗体を用いて、破骨細胞形成におけるmitfの発現を検討している。さらに、Mitfと結合する転写因子をスクリーニングするために、培養骨髄細胞から破骨細胞を形成する系を材料にして、cDNAライブラリーを作成して2-ハイブリッドスクリーニングを行っている。現在のところ転写因子がスクリーニングされていないので、pGBTMiTによって発現する蛋白がMitfとして認識できるかどうか検討している。Mitfが蛋白として発現していない場合、全長のmitfを用いて、Mitfと結合する転写因子をスクリーニングを試みる。破骨細胞においては、mitfのノックアウトマウスでは破骨細胞が正常に形成されるので、Mitfがヘテロダイマーを形成する結合する相手の同定が期待されている。

mi/mi Osteoclast formation is incomplete, and we are not in the process of osteoclast formation. Bone marrow cells from normal animals (ddy) were cultured in the presence of vitamin D. In cultured cells, multinucleated osteoclast cells were formed, and the development of Mitf in osteoclast formation was discussed. The mitf antibody was prepared with the C-terminal 15 amino acid residue. The results of these assays include mitf, positive control, NIH 3T3 cells, and nucleus-specific staining. The results of the full-length mitosis were consistent with those of the NIH 3T3 cells. The C-terminal 15 amino acid residue of mitf is very similar to that of mitf. Now the use of antibodies against this full-length mitf and the development of mitf in osteoclast formation are discussed. In addition, the gene expression system of osteoclast formation in cultured osteoblasts was constructed by using cDNA and Mitf. Now, the expression factor of pGBTMiT is different from the expression factor of Mitf. Mitf protein expression in the case, the length of the mitf expression in the case, mitf binding factor in the case of the mitf expression in the case Osteoclast formation is expected to be stable in both mitf and mitf phases.