ウシ象牙芽細胞の分泌するゼラチナーゼの役割

牛成牙本质细胞分泌的明胶酶的作用

• 批准号: 09771656
• 负责人: 里吉 正徳
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kanagawa Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771656/
• 关键词: 象牙芽細胞; マトリゲル; フォスフォフォリン; タイプIVコラーゲン; ゼラチナーゼ; マトリックスメタロプロテアーゼ; エンザイモグラム

ウシ象牙芽細胞の培養期間中に、培養上清(基質であるマトリゲルを溶解する)を3日毎に回収し、このサンプルを0.2% gelatine zymographyにかけた結果、培養上清にMr.72,000と95,000のMMP-2とMMP-9の2種類の蛋白分解酵素の存在が確認された。そのうちMMP-2は培養初期では活性が低く、培養開始3から4週目(石灰化開始期;アルカリフォスファターゼの減少に伴い、オステオカルシンとミネラルの蓄積が開始される)に細胞突起の伸展、ALPの低下、基質の石灰化が起こるのと呼応して上昇すること、更にはこの時期のメディアをフォスフォフォリン(DPP)と酵素反応させ、リン蛋白に対する分解能を調べたところ、DPPを断片化することが判明した。また、3日毎のサンプルの全RNAを抽出し、RT-PCR法により培養基質を分解すると考えられる酵素のmRNAの発現を調べた。プライマーはヒトMMP-2(Biochem.J320,777-783,1996)、MMP-9(Biochem.J 320,777-783,1996)、GAPDH(J Steroid Biochem 57,349-355,1996)を用いた。その結果、MMP-2mRNAの細胞内メッセージの発現は、酵素活性とほぼ同時期であった。以上の知見からMMP-2は、石灰化のための細胞外リン酸化開始の引金となる、高分子のDPP分解の役割を担っていると示唆された。

ウ シ ivory bud cells の cultivation during に, supernatant (matrix で あ る マ ト リ ゲ ル を dissolved す る) を 3 in their に back 収 し, こ の サ ン プ ル を 0.2% gelatine zymographyに けた けた results, culture supernatant にMr.72,000と95,000 <s:1> MMP-2とMMP-9 <s:1> 2-type <s:1> proteolytic enzyme <e:1> presence が confirmation された. Youdaoplaceholder0 うち うちMMP-2 で activity が low く at the initial stage of <s:1> culture, が ら at the beginning of culture 3 ら ら4 weeks (the initiation stage of callization; ア ル カ リ フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ の reduce に い, オ ス テ オ カ ル シ ン と ミ ネ ラ ル の accumulation が began さ れ る) に cells swelled の stretching, ALP の is low, the matrix の calcification が up こ る の と shout 応 し て rise す る こ と, more に は こ の period の メ デ ィ ア を フ ォ ス フ ォ フ ォ リ ン (DPP) と enzyme reverse 応 さ せ, リ ン protein に す seaborne る decomposition to を べ た と こ ろ, DPP を fragment す る こ と が.at し た. ま た, 3 in their の サ ン プ ル の total RNA を drew し, rt-pcr method に よ り を cultivation matrix decomposition す る と exam え ら れ る enzyme の mRNA の 発 now を adjustable べ た. Youdaoplaceholder0, プラ, ヒト, ヒト, ヒトMMP-2(Biochem.J320, 777-733,1996), MMP-9(Biochem.J 320, 777-733,1996), GAPDH(J Steroid Biochem 57,349-35,1996)を た た. The そ <s:1> results, the occurrence of mMP-2 mrna in <s:1> cells at メッセ ジ ジ ジ <e:1>, and the enzymatic activity とほぼ at the same time であった. Above の knowledge か ら MMP - 2 は, lime の た め の extracellular リ ン acidification began の lead gold と な る, polymer の DPP decomposition の "を cut bear っ て い る と in stopping さ れ た.

项目成果

Y.Suzuki: "Extracellular Processing of Bone and Dentiue Proteins in Matrix Mineralization" Connective Tissue Research. 35. 223-229 (1996)

Y.Suzuki：“基质矿化中骨和牙本质蛋白的细胞外加工”结缔组织研究。

Y.M.Takagaki: "Matrix Mireralization and the Differentiation of in Osteocyto-like cells in Culture" Journal of Bone and Mineral Research. 10. 231-242 (1995)

Y.M.Takagaki：“基质微化和培养中骨细胞样细胞的分化”《骨与矿物质研究杂志》。

M.Satoyoshi: "Extracellular Processing of Dentin Matrix Protein in the Mineralizing Culture Odontoblasts" Calcified Tissue International. 57. 237-241 (1995)

M.Satoyoshi：“矿化培养成牙本质细胞中牙本质基质蛋白的细胞外加工”钙化组织国际。

Y.M.Takagaki: "Matrix Mineralization and the Oifferentiation of Osteocyto-like cells in culture" Journal of Bone and Mineral Research. 10. 231-242 (1995)

Y.M.Takagaki：“培养物中骨细胞样细胞的基质矿化和分化”《骨与矿物质研究杂志》。

M.Satoyoshi: "Extracellular Processing of Dentin Matrix Protein in the Mineralizing Odontoblasts Culture" Calcified Tissue International. 57. 237-241 (1995)

M.Satoyoshi：“矿化成牙本质细胞培养物中牙本质基质蛋白的细胞外加工”钙化组织国际。