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スフェロイドを用いた胃上皮幹細胞の維持に作用するWnt標的分子の探索

利用球体寻找影响胃上皮干细胞维持的Wnt靶分子

基本信息

批准号：
21659077
负责人：
大島正伸
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

消化管上皮幹細胞の維持にはWntシグナルが重要な役割を果たしている。Wntシグナルの持続的亢進は、上皮細胞の未分化性亢進および腫瘍発生の原因となる。しかし、Wntシグナルの標的遺伝子の中で、どの因子がこれらの作用を誘導しているのかは未だ不明である。これまでに作製した胃粘膜でWntを亢進するマウスの解析から、Wnt活性化により胃粘膜上皮細胞で発現が誘導される遺伝子群を同定している。本課題研究では、これらの候補遺伝子群の中から未分化性維持および細胞の腫瘍化の原因となる遺伝子を、胃上皮細胞初代培養細胞を用いた解析により同定することを目的として実施した。昨年度に続き、回収した胃上皮細胞をマトリゲルを用いて3次元初代培養実験を行い、Wnt依存的に単層上皮からなるシスト構造が形成されることを明らかにした。この培養法を用いて、炎症に重要なPGE_2経路遮断による上皮細胞増殖抑制機構を明らかにしてGastroenterology誌に報告した。一方、Wnt標的遺伝子の候補とした遺伝子群の発現をマトリゲルの上皮細胞を回収してreal-time RT-PCRで解析した結果、複数の遺伝子の発現誘導が確認され、真にWnt標的遺伝子であると考えられた。一方、これらの遺伝子発現をsiRNA等で遮断した影響を初代培養系実験により解析する予定であったが、リポソーム法、エレクトロポレーション法、およびレンチウイルスによっても、単離した胃上皮細胞への効率のよい遺伝子導入が出来なかった。以上の結果から、Wnt依存的にシストを形成する上皮細胞をSV40T抗原の導入などによりパッセージ可能な不死化株化細胞として遺伝子導入を可能とすることが、今後の重要な課題と考えられた。

The maintenance of digestive tract epithelial stem cells is very important. Wnt is the cause of hyperplasia of epithelial cells and undifferentiated hyperplasia of epithelial cells, which is the cause of swelling and infection.しかし, Wnt シグナルの名的伝子の中で, どの Factor がこれらの Effect をinducing しているのかは不だUnknown である.これまでにしたgastric mucosaでWntをhyperactivityするマウスのanalyticsから、Wnt Activated gastric mucosal epithelial cells are induced by the activation of gastric mucosal epithelial cells. This topic studies the causes of swelling and ulceration of undifferentiated and maintained cells in the subgroup of candidate supplements.る伝子を、Gastric epithelial cell primary culture cells were analyzed using the same method as the purpose of the analysis. Last year, we collected gastric epithelial cells from our company and used our 3-dimensional primary culture system.い, Wnt-dependent single-layer epithelial epithelial structure is formed. The culture method is used, inflammation is important, PGE_2 pathway is blocked, epithelial cell proliferation inhibitory mechanism is reported in Gastroenterology Journal. On the one hand, Wnt target's remaining candidate is the remaining candidate and the remaining one is real-time. The result of RT-PCR analysis is the result, the plural number is induced and confirmed, and the true Wnt target is the test result. One side, これらの缝子発 appear をsiRNA and other blocking したを primary culture system の験により analysis する predetermined であったが, リポソーム method, エレクトロポレーション法、およびレンチウイルスによっても、 The efficiency of the single separation of gastric epithelial cells is the introduction of the remaining components into the gastric epithelial cells. As a result of the above, Wnt-dependent epithelial cells were formed and the SV40T antigen was introduced into the epithelial cells. It is possible to introduce undead cells and transformed cells, and it is possible to introduce them, and it is an important issue in the future.