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ポルフィロモナス・ジンジバリスの宿主細胞に多々慰する接着・障害機構の解明

阐明牙龈卟啉单胞菌经常对宿主细胞造成的粘附和损伤机制

基本信息

批准号：
09771839
负责人：
吉岡昌美
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、Porphyromonas gingivalis ATCC 33277及びその血球凝集活性欠損株であるM2株、M3株の外膜小胞(OM-V)を用いてヒト歯肉線維芽細胞(HGF)に対する細胞毒性を調べた。細胞のViabilityを調べるために行ったWST-1 assayの結果、5μg/mlのOM-Vを作用させたHGFの脱水素酵素活性は、ATCC 33277株でコントロールに比べて50%程度、M3株では約30%の活性低下を認めたが、M2株では活性低下を全く認めなかった。トリパンブルー色素排除試験および形態学的変化の評価は25、50μg/mlのOM-Vを作用させて行った。その結果、ATCC 33277株では生細胞率が各々86.4%、63.3%にまで低下したが、M2株では各々94.8%、91.4%とわずかな低下しか認められなかった。また、M3株はATCC 33277株とほぼ同じ数値を示した。形態学的変化は、ATCC 33277株で両濃度ともHGFの半数以上が球状化し、M3株では一部の細胞が球状化し、M2株では全く影響しなかった。以上のことから昨年度に報告したDNA断片化や細胞凝集活性と同様、細胞毒性活性もATCC 33277株では強く認められるもののM2株では殆ど認められないことが明らかとなった。各OM-V標品についてP.gingivalisのトリプシン様酵素の1つであるPase-Cの存在をウエスタンブロッティング法を用いて調べたところ、M2株にはPase-Cが検出されなかった。予備実験の結果、本菌の産生するトリプシン様酵素には細胞凝集活性を示すものがあり、本研究においてもトリプシン様酵素活性と細胞凝集活性、細胞毒性活性の間には強い関連が示唆されたことから、本菌の細胞接着、障害作用の主役をなすのは例えばPase-Cのようなトリプシン様酵素ではないかと考え、現在検索を進めている。

This year, Porphyromonas gingivalis ATCC The outer membrane vesicles (OM-V) of 33277 and the M2 strain and the M3 strain, which are deficient in hemagglutination activity, were adjusted using HGF to control cytotoxicity. The result of WST-1 assay of cell viability, the action of 5μg/ml OM-V, the dehydratase activity of HGF, ATCC The 33277 strains of でコントロールに are about 50% lower than the べて, the M3 strains are about 30% less active, and the M2 strains are less active and have lower activity.トリパンブルーPigment Exclusion Test験およびMorphological Change Evaluationの価は25, 50μg/mlのOM-Vを Effectさせて行った.そのRESULTS, ATCC The cell rate of 33277 strains was 86.4% and 63.3% respectively, and the cell rate was low. The M2 strain has 94.8% and 91.4% of the とわずかなlow しかidentification められなかった.また、M3 strain はATCC 33277 strain とほぼ Same as じ number value をshow した. For the morphological changes, ATCC 33277 strain showed that more than half of the cells were spheroidized due to the concentration of HGF, M3 strain showed that part of the cells were spheroidized, and M2 strain showed that all cells were spheroidized. The above mentioned DNA fragmentation, cell agglutination activity, and cytotoxic activity were reported in last year's ATCC 33277 strain では strong くcognize められるもののM2 strain では殆ど cognize められないことが明らかとなった. Each OM-V standard product is P.gingivalis and Pase-C. In the をウエスタンブロッティング法をいて调べたところ, M2 strain にはPase-C が検出されなかった. Preliminary results, the production of this bacterium and the enzyme and cell agglutination activity of the bacteria are shown.り, This study focuses on the enzyme activity, cell agglutination activity, and cytotoxic activity of the においてもトリプシン様The strong connection between the bacteria and the cell adhesion of the bacterium, the main role of the barrier effect, the main role of the bacteria Pase-C のようなトリプシン様Enzyme ではないかとtestえ、Now 検SO を入めている.