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神経芽腫細胞における神経細胞分化誘導とテロメラーゼ活性に関する研究

神经母细胞瘤细胞神经元分化诱导及端粒酶活性研究

基本信息

批准号：
09780537
负责人：
掛谷秀昭
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

最近までに,正常体細胞ではほとんど認められないテロメラーゼ活性が,さまざまな癌組織には高頻度で検出されるといった知見が集まり,癌の形成におけるテロメラーゼ活性化の関与が示唆されている。そこで,テロメラーゼ活性阻害物質を探索するためのバイオアッセイ系を構築し,テロメラーゼ活性阻害物質の探索を行った。これまでに,テロメラーゼ活性の高感度検出法としてPCRを利用したTRAP法が報告されている。このTRAP法を基にしてwax barrier不要のhot start法やstrech PCRのプライマーを取り入れることにより,微生物代謝産物から簡便かつ定量性良く阻害剤を検出するための探索系を確立した。本研究では,テロメラーゼをヒト白血病細胞U937のS100画分を調製して用いた。スクリーニングの結果,カビの生産するalterperylenolが阻害活性を示すことを見いだした。alterperylenolはPCR反応を阻害することなく,テロメラーゼ反応を100μM以上の濃度で阻害した。一方,その類縁体であるaltertoxin I(5,6位の二重結合が飽和した化合物)は1mMでも阻害せず,テロメラーゼ阻害活性には分子内のα,β-不飽和カルボニル基が重要であることが示唆された。さらに,alterperylenolをU937細胞へ処理し,細胞レベルでのテロメラーゼ活性に与える影響について検討したところ,U937細胞の生存率に影響を与えない1μMの濃度で,20時間後にtelomerase活性の減少が確認された。以上よりalterperylenolが特異性の高いテロメラーゼ阻害剤であることが明らかになり,今後,癌細胞と正常細胞におけるテロメラーゼの必要性に関する研究に有用であろう。

Recently, normal somatic cells have been found to be highly active, but cancer tissues have been found to be highly active, and cancer formation is associated with activation and expression. In this paper, we explore the structure of active barrier substances. In this case, the highly sensitive PCR assay and TRAP assay were used to report the activity of the enzyme. This TRAP method is based on wax barrier, not hot start method, strech PCR and detection system is established. In this study, we investigated the modulation of S100 in leukemia cells U937. As a result of this study, the production of alterperylenol has been shown to have a protective activity. Alterylenol inhibits PCR activity at concentrations above 100μM. One of the compounds, altertoxin I(compound with double binding saturation at position 5 and 6), was found to be important for inhibiting α,β-unsaturated groups in the molecule at 1 mM. In addition, the effect of alterperylenol on telomerase activity in U937 cells was investigated at 1μM concentration, and the decrease of telomerase activity was confirmed after 20 hours. The above-mentioned alterperylenol has high specificity and is useful for future research on the necessity of cancer cells and normal cells.