神経芽腫細胞における神経細胞分化誘導とテロメラーゼ活性に関する研究

神经母细胞瘤细胞神经元分化诱导及端粒酶活性研究

基本信息

批准号：
09780537
负责人：
掛谷秀昭
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

最近までに,正常体細胞ではほとんど認められないテロメラーゼ活性が,さまざまな癌組織には高頻度で検出されるといった知見が集まり,癌の形成におけるテロメラーゼ活性化の関与が示唆されている。そこで,テロメラーゼ活性阻害物質を探索するためのバイオアッセイ系を構築し,テロメラーゼ活性阻害物質の探索を行った。これまでに,テロメラーゼ活性の高感度検出法としてPCRを利用したTRAP法が報告されている。このTRAP法を基にしてwax barrier不要のhot start法やstrech PCRのプライマーを取り入れることにより,微生物代謝産物から簡便かつ定量性良く阻害剤を検出するための探索系を確立した。本研究では,テロメラーゼをヒト白血病細胞U937のS100画分を調製して用いた。スクリーニングの結果,カビの生産するalterperylenolが阻害活性を示すことを見いだした。alterperylenolはPCR反応を阻害することなく,テロメラーゼ反応を100μM以上の濃度で阻害した。一方,その類縁体であるaltertoxin I(5,6位の二重結合が飽和した化合物)は1mMでも阻害せず,テロメラーゼ阻害活性には分子内のα,β-不飽和カルボニル基が重要であることが示唆された。さらに,alterperylenolをU937細胞へ処理し,細胞レベルでのテロメラーゼ活性に与える影響について検討したところ,U937細胞の生存率に影響を与えない1μMの濃度で,20時間後にtelomerase活性の減少が確認された。以上よりalterperylenolが特異性の高いテロメラーゼ阻害剤であることが明らかになり,今後,癌細胞と正常細胞におけるテロメラーゼの必要性に関する研究に有用であろう。

最近，已经发现，在正常体细胞中很少见到的端粒酶活性在各种癌症组织中经常被检测到，这表明端粒酶激活参与癌症形成。因此，构建了生物测定系统以搜索端粒酶活性抑制剂，并搜索端粒酶活性抑制剂。迄今为止，使用PCR的陷阱方法据报道是一种用于检测端粒酶活性的高度敏感方法。基于这种陷阱方法，我们通过合并不需要蜡屏障的热启动方法和strech PCR的底漆来建立一个以简单和定量方式从微生物代谢产物中检测抑制剂的搜索系统。在这项研究中，端粒酶用于制备和使用人类白血病细胞U937的S100部分。筛选结果表明，产生霉菌的二氯替诺表现出抑制活性。二乙醇抑制了高于100μM的浓度的端粒酶反应，而不会抑制PCR反应。另一方面，其类似物，替毒素I（一种在5和6位置饱和的双键饱和的化合物）即使在1 mm处也没有抑制，这表明分子内α，β-不饱和羰基对端粒酶抑制活性很重要。此外，当用U937细胞处理二氯替诺酚并研究了细胞水平上端粒酶活性的影响时，可以证实，端粒酶活性在20小时后以1μM的浓度降低，这不影响U937细胞的存活率。从上面可以揭示出二邻苯二甲醇是一种高度特异性的端粒酶抑制剂，并且在对癌症和正常细胞中端粒酶需求的未来研究中将很有用。