微生物代謝産物由来の機能性天然分子の探索・創製と応用研究

源自微生物代谢产物的功能性天然分子的搜索、创造和应用研究

基本信息

批准号：
16073223
负责人：
掛谷秀昭
金额：
$ 18.37万
依托单位：
Kyoto University (2007)The Institute of Physical and Chemical Research (2004-2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

真核細胞において生命現象の中軸を担う細胞周期、血管新生、細胞死の素過程には未解明な部分が多く、これらを制御する新規天然有機化合物の探索・創製・応用研究の意義は大きい。本年度は、主としてこれまでに確立した評価系を利用して、微生物代謝産物をスクリーニング源として探索研究を行うとともに、複数の生理活性小分子に関する化学生物学的な解析研究を行った。マウス乳がん細胞FM3Aのcdc2キナーゼが温度感受性になった変異株tsFT210細胞においてG2/M期停止作用を有する放線菌ストレプトミセス属A2215株の培養抽出物を見出した。そこで、培養上清をn-BuOH抽出後、Diaion HP20、ODSカラムクロマトグラフィーにより、順次、活性物質の単離・精製を行い、活性物質として淡黄色不定形固体RKGS-2215Aを得た。FAB-MSおよび各種NMRスペクトルの解析結果より、RKGS-2215A(C31H48010)は新規ポリエン化合物であることを明らかにした。フローサイトメトリー解析、ならびに細胞染色解析の結果、RKGS-2215Aは1 μg/m1の濃度でtsFT210細胞の細胞周期をM期に停止することが明らかになった。また、我々がこれまでに見出している糸状菌由来の血管新生抑制剤エポキシキノールBの詳細な作用機構解析研究を行った。その結果、エポキシキノールBは、ヒト臍帯静脈血管内皮細胞(HUVECs)において、VEGFR2に不可逆的に結合し、VEGFによって活性化される細胞内情報伝達系を抑制することを明らかにした。

细胞周期，血管生成和细胞死亡的基本过程中有许多不清楚的部分，它们在真核细胞中起着核心作用，细胞周期，血管生成和细胞死亡的基本过程以及控制这些新的自然有机化合物的重要性。今年，我们使用微生物代谢物作为筛查来源进行了探索性研究，主要使用先前建立的评估系统，并对多种生物活性小分子进行了化学生物学分析研究。我们发现了放线菌A2215的培养物提取物，该提取物在突变体TSFT210细胞中具有G2/m相阻滞作用，其中小鼠乳腺癌细胞的CDC2激酶FM3A对温度敏感。因此，在提取培养物上清液后，将活性物质顺序分离，并通过诊断HP20和ODS色谱柱色谱法纯化，以获得浅黄色的无定形无定形固体RKGS-2215A作为活性物质。 FAB-MS和各种NMR光谱的分析结果表明，RKGS-2215A（C31H48010）是一种新型的多烯化合物。流式细胞仪分析和细胞染色分析表明，RKGS-2215A以1μg/m1的浓度在M期以M相的TSFT210细胞的细胞周期。我们还对血管生成抑制剂环氧喹啉B的作用机理进行了详细分析，我们已经发现了这一点。结果，据揭示了环氧喹酚B不可逆地与人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）（HUVECS）中的VEGFR2结合并抑制由VEGF激活的细胞内信号传导系统。