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脳内光受容と生物時計を支える分子基盤

支持大脑感光和生物钟的分子基础

基本信息

批准号：
09780563
负责人：
岡野俊行
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

交付申請書に記載の研究実施計画に沿って研究を進め、以下の知見を得た。【松果体の光情報伝達経路と時計発振系の解析】ニワトリ松果体Gαの全一次構造決定に続いて、松果体のG蛋白質が光受容蛋白質ピノプシンと共存すること、Gt_1αおよびG_<11>αが光刺激依存的に光受容蛋白質から解離することを明らかにした。これらのことから、Gt_1を介した既知の光情報伝達経路の他に、G_<11>αを介した全く新しい経路が存在することが強く示唆された。これと並行して、ヒヨコ松果体細胞を用いたディファレンシャルディスプレイ解析を行い、時刻依存的に転写される遺伝子を探索した。その結果、分子シャペロンの一種であるHSP90遺伝子の転写量が概日時計によって調節されていると考えられた。また、概日時計への光入力系にチロシンリン酸化蛋白質が関与している可能性を検討した。その結果、ヒヨコ松果体MAPキナーゼが光刺激の直後に脱リン酸化されること、さらにMAPキナーゼのチロシンリン酸化量および活性は恒暗条件下においても概日リズムを示すことがわかった。また、MEKの阻害剤(PD98059)を培養松果体に投与すると、概日時計の位相シフトが観察された。これらのことから、MAPキナーゼは概日時計を構成する分子であり、MAPキナーゼの活性化・不活性化のサイクルは、概日時計が駆動するために必要であることが明らかになった。【脳深部における光情報伝達経路】脳深部(外側中隔、視床下部)に存在する光受容体を特異的に認識する抗体を作製し、免疫組織化学的手法により脳深部光受容細胞の形態や細胞内における光受容分子の局在について検討した。その結果、脳脊髄液接触ニューロンのノブ状構造および細胞膜上に光受容蛋白質が集積していることがわかった。

The delivery of the application record of the study has been completed in the course of the study, and the following comments have been received. The pineal gland G α was used to determine the concentration of pineal protein, pineal G protein, pineal protein, pineal protein, pine It is known that the light situation has reached the road, the light situation has reached the road, and the alpha information has been forced to show that there is a new road, which is known as the light situation, the light, the light, the In parallel, the pineal gland cell is used to analyze the data, and the time-dependent device is used to explore the pineal gland cell. The results of the experiment and the molecular weight analysis show that the average daily writing volume of the HSP90 cluster is estimated to be high. The possibility of acidified protein and protein acidification is very important in the system of light input. The results showed that MAP in the pineal gland was stimulated by light stimulation, and then the pineal gland was acidified and acidified. The amount of acidification was measured and the activity was measured under constant dark conditions. the temperature of the pineal gland was measured in the dark. The pineal gland was injected into the pineal gland by MEK and PD98059, and the phase of the experiment was measured. It is necessary to make sure that it is necessary to verify that it is necessary to monitor the activity of the computer, the general time of the day, the activity of the MAP, the activity of the MAP, the activity of the computer, and the time of the day. In the deep (external septum, the lower part of the bed), there is a special antibody against the photoreceptor, and the immunocytochemistry technique is used to detect the morphology of the photoreceptor. in the deep (outer septum, lower part of the bed), there is a special antibody against the photoreceptor. the immunocytochemistry technique is used to detect the morphology of the photoreceptive cells. The results showed that the cells on the cell membrane of photocapacitive proteins were collected in contact with the spinal fluid in contact with the cell membrane.