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時刻情報の生成・制御を支える転写因子群の発現プログラム

支持时间信息生成和控制的转录因子表达程序

基本信息

批准号：
13206022
负责人：
岡野俊行
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

交付申請書に記載の研究実施計画に沿って研究を遂行し、下記の成果を得た。1.新規時計遺伝子Bmal2の機能解析を進めるためにまず、ニワトリ松果体に発現する時計遺伝子(Bmal1,Bmal2,Clock, Per2,Cry1,Cry2)を単離した。これらの転写調節機能を転写アッセイより検討した結果、BMAL2は低用量ではCLOCKおよびBMAL1と協調的に転写を増大させ、高用量では自らの転写促進活性を抑制した。次に、MAPキナーゼ(MAPK)活性が松果体において日周変動することに着目し、MAPKと相互作用する時計分子を探索した。その結果、活性化型MAPKはBMAL1と会合し、その特定のアミノ酸残基(Thr534)のリン酸化を介してBMAL1の転写促進活性を抑制することが判った。一方、ニワトリ松果体細胞を培養し、明暗周期下あるいは恒暗条件下における時計遺伝子のmRNA発現様式を詳細に調べた結果、Per2の転写抑制因子であるCRY1およびCRY2のmRNA量がいずれも明期において増大することが判った。このことから、光によりCry1/2遺伝子の転写が誘導され、概日時計の光位相シフト(光同調)をひき起こす可能性が考えられた。2.光位相シフトに関わる新規時計構成遺伝子を網羅的に検索するため、時刻特異的に光誘導される遺伝子をディファレンシャルデイスプレイ解析により単離した。得られた候補遺伝子を解析した結果、概日時計の時刻が遅れる夕刻の光刺激に伴いmRNA量が増加する分子として転写因子E4BP4を同定した。転写アッセイの結果、E4BP4はPer2遺伝子の転写抑制を介して概日時計の位相後退(時計を遅らせる作用)に関与すると推定された。3.個体レベルにおいて時計分子の機能を解析するため、ゼブラフィッシュを用いた時計遺伝子導入個体の作成を目指し、ゼブラフイッシュのBmal遺伝子を単離した。

The research and implementation plan recorded in the delivery application form will be followed, the research will be carried out, and the results noted below will be obtained. 1. Functional analysis of the new clock legacy watch Bmal2 (Bmal1, Bmal2, Clock, Per2,Cry1,Cry2)を単里した.これらの転WRITE adjustment function を転WRITE アッセイより検した results, BMAL2 は low dosage では CLOC KおよびBMAL1 coordinates the activity of the active ingredient to increase the activity, and the high dosage of the drug increases the activity and suppresses the activity. Time に, MAP キナーゼ(MAPK) activity が pineal gland において daily and weekly changes することに eye し, MAPK と interaction する timepiece molecule を exploration した. As a result, the activated MAPK was combined with BMAL1, and the specific acid residue (Thr534) of BMAL1 was acidified to promote the activity and inhibit the activity. On the one hand, ニワトリpineal cell を culture し, under the light and dark cycle あるいは under constant dark conditions におけるchronometer 伝子の槺appear様styleをDetails に Adjustment べたAs a result, the amount of mRNA for the Per2 writing inhibitory factor CRY1 and CRY2 increased significantly.このことから, 光によりCry1/2 缝子の転写がinducing され, and the date timepiece の光phase シフト(light synchronization) をひきrise こすpossibility が考えられた. 2. The new light-phase シフトに关わる timepiece constitutes the に検SO するため of the obsolete net, and the time is specific. The light-induced される伝子をディファレンシャルデイスプレイanalytic により単利した. The results of the analysis and analysis of the candidate addendum are obtained, and the time of the day and night time is determined by the light stimulation and the amount of mRNA is increased. The results of the writing of the 転ッセイの, E4BP4はPer2 伝子の転WRITE suppresses the phase of the timepiece of the timepiece (the role of the timepiece) and the すると inference of the timepiece. 3. Function analysis of individual timepiece molecules and use of timepieces The timepiece legacy is introduced into the individual の成を目し、ゼブラフイッシュのBmal legacy 伝子を単利した.