遺伝子導入動物から迫る概日時計の新規構成分子

来自转基因动物的生物钟的新组成分子

• 批准号: 15687002
• 负责人: 岡野 俊行
• 金额: $ 17.47万
• 依托单位: Waseda University (2005)The University of Tokyo (2003-2004)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15687002/
• 关键词: 光受容; 光生物; 細胞情報; 概日時計; 動物生理; ニワトリ; ゼブラフィッシュ; サーカディアンリズム; トランスジェニック; メラトニン; 遺伝子クローニング; 生物時計; チューブリン; リン酸化; 松果体

交付申請書に記載の研究実施計画に沿って研究を遂行し、下記の成果を得た。研究代表者らはこれまでに、概日時計の位相が前進する際にニワトリ松果体においてmRNAが誘導される新規分子を同定した。この分子をLCGと命名し、全長cDNAのクローニング・特異的抗体の作成ならびに強制発現系における細胞内局在の解析等を行ったところ、LCGは中心体のマーカーであるγチューブリンと共局在することが分かった。そこで次に、LCGが松果体においてγチューブリンと相互作用する可能性を免疫沈降法を用いて検討した。その結果、LCGとγチューブリンの結合が確認された。これらの結果から、LCGは時刻シグナルにしたがい中心体の活性を制御している分子である可能性が示唆された。LCGの解析と並行し、新しい光同調経路の発見を目指し、新規光受容分子を探索した。その結果、ニワトリゲノム中に、青色光受容タンパク質であるクリプトクロームの類似遺伝子が存在することを見いだした。これをcCRY4と命名し、cCRY4に関する解析を行った。その結果、cCRY4のmRNAは、網膜および松果体などの光感受性の概日時計組織に多く発現しており、培養した松果体細胞中においてmRNA量が光依存的に上昇することが判った。そこで、cCRY4を特異的に認識する抗体を作成し、タンパク質発現を調べたところ、松果体の多数の実質細胞および一部の間質細胞に存在することが判った。さらに、タンパク質発現もmRNAの発現量と同様の光依存的変動を示すことや、分画した細胞抽出液の水溶性画分中にcCRY4が検出されることがわかった。これらの結果から、cCRY4は光感受性の概日時計組織において青色光を受容する新規の光受容分子であり、ピノプシン等をはじめとする既知の光受容分子とは全く異なる光情報伝達経路に関与している可能性が強く示唆された。

Submit the application form に to record the <s:1> research implementation plan に along the って research を to carry out <s:1>, and below to record the <s:1> results を to た. Research representatives ら は こ れ ま で に, almost daily hour meter の phase が forward す る interstate に ニ ワ ト リ pineal に お い て mRNA が induced さ れ る molecular を new rules might be し た. こ の molecular を LCG と named し, full length cDNA の ク ロ ー ニ ン グ の done, specific antibody な ら び に 発 is now compulsory に お け bureau in the resolution of の る cell line を っ た と こ ろ, LCG は centrosome の マ ー カ ー で あ る gamma チ ュ ー ブ リ ン と total bureau in す る こ と が points か っ た. そ こ で に, LCG が pineal に お い て gamma チ ュ ー ブ リ ン と interaction す る possibility を を immune sink method using い て beg し 検 た. The そ <s:1> result, LCGとγチュ ブリ ブリ <e:1> <s:1> が combined with が confirmed された. こ れ ら の results か ら, LCG は moment シ グ ナ ル に し た が い centrosome の を active suppression し て い る molecular で あ が る possibility in stopping さ れ た. LCG <s:1> analysis と parallel <s:1>, new <s:1> optical homology pathway <s:1> discovery を target <s:1>, new regulation light acceptor を exploration <s:1> た. そ の results, ニ ワ ト リ ゲ ノ ム に, cyan light by let タ ン パ ク qualitative で あ る ク リ プ ト ク ロ ー ム の similar posthumous son 伝 が exist す る こ と を see い だ し た. Youdaoplaceholder5 れをcCRY4と name と, cCRY4に related する parse を line った. そ の results, cCRY4 の mRNA は, retinal お よ び pineal な ど の light sensitivity の is day when plan organization に much く 発 now し て お り, cultivating し た pineal cells に お い て mRNA quantity が light dependent に rise す る こ と が convicted っ た. そ こ で, cCRY4 を specific に know す る antibody を し, consummate タ ン パ ク qualitative 発 now を adjustable べ た と こ ろ, the pineal gland の most の be stromal cells お よ び a の mesenchymal cells exist に す る こ と が convicted っ た. さ ら に, タ ン パ ク qualitative 発 now も mRNA の と 発 now quantity with others の light dependent - move を shown す こ と や, painting し た cell extract の water-soluble painting points in に cCRY4 が 検 out さ れ る こ と が わ か っ た. こ れ ら の results か ら, cCRY4 は susceptibility の is day light meter the organization に お い て cyan light を by let す る new rules の light by the capacity of molecular で あ り, ピ ノ プ シ ン etc を は じ め と す る both know の light by the capacity of molecular と は く all different な る light intelligence 伝 da 経 road に masato and し て い る strong possibility が く in stopping さ れ た.

项目成果

Molecular cloning, mRNA expression, and immunocytochemical localization of a putative blue-light photoreceptor CRY4 in the chicken pineal gland

鸡松果体中假定的蓝光光感受器 CRY4 的分子克隆、mRNA 表达和免疫细胞化学定位

• 发表时间: 2006
• 期刊: J.Neurochem. 97
• 作者: Yamaguchi;H.;Harada;A.;Toshinori Takashi;Ikeda D et al.;Yoko Kubo et al.
• 通讯作者: Yoko Kubo et al.

体内時計の時間調節を担うタンパク質リン酸化反応

负责生物钟时间调节的蛋白质磷酸化反应

• 发表时间: 2005
• 期刊: 生化学 77
• 作者: 土居雅夫;岡野俊行
• 通讯作者: 岡野俊行

GRK1 and GRK7: Unique cellular distribution and widely different activities of opsin phosphorylation in the zebrafish rods and cones

• DOI: 10.1111/j.1471-4159.2006.03920.x
• 发表时间: 2006-08
• 期刊: Journal of Neurochemistry
• 影响因子: 4.7
• 作者: Yasutaka Wada;Junichi Sugiyama;T. Okano;Y. Fukada

岡野俊行(分担執筆): "「時計遺伝子の分子生物学」のうち「時計遺伝子総論:脊椎動物」の項を分担執筆"シュプリンガーフェアラーク東京. 204(8) (2004)

Toshiyuki Okano（合著者）：“共同撰写了《时钟基因的分子生物学》的《时钟基因概述：脊椎动物》部分”Springer Verlag Tokyo 204(8) (2004)。

深田吉孝(分担執筆): "「図説分子病態学」改訂3版のうち「視覚異常」の項を分担執筆"中外医学社. 502(6) (2003)

Yoshitaka Fukada（合著者）：“共同撰写了修订版《分子病理学图解》第 3 版中关于‘视觉异常’的部分”Chugai Igakusha 502(6) (2003)。