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遺伝子導入動物から迫る概日時計の新規構成分子

来自转基因动物的生物钟的新组成分子

基本信息

批准号：
15687002
负责人：
岡野俊行
金额：
$ 17.47万
依托单位：
Waseda University (2005)The University of Tokyo (2003-2004)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

交付申請書に記載の研究実施計画に沿って研究を遂行し、下記の成果を得た。研究代表者らはこれまでに、概日時計の位相が前進する際にニワトリ松果体においてmRNAが誘導される新規分子を同定した。この分子をLCGと命名し、全長cDNAのクローニング・特異的抗体の作成ならびに強制発現系における細胞内局在の解析等を行ったところ、LCGは中心体のマーカーであるγチューブリンと共局在することが分かった。そこで次に、LCGが松果体においてγチューブリンと相互作用する可能性を免疫沈降法を用いて検討した。その結果、LCGとγチューブリンの結合が確認された。これらの結果から、LCGは時刻シグナルにしたがい中心体の活性を制御している分子である可能性が示唆された。LCGの解析と並行し、新しい光同調経路の発見を目指し、新規光受容分子を探索した。その結果、ニワトリゲノム中に、青色光受容タンパク質であるクリプトクロームの類似遺伝子が存在することを見いだした。これをcCRY4と命名し、cCRY4に関する解析を行った。その結果、cCRY4のmRNAは、網膜および松果体などの光感受性の概日時計組織に多く発現しており、培養した松果体細胞中においてmRNA量が光依存的に上昇することが判った。そこで、cCRY4を特異的に認識する抗体を作成し、タンパク質発現を調べたところ、松果体の多数の実質細胞および一部の間質細胞に存在することが判った。さらに、タンパク質発現もmRNAの発現量と同様の光依存的変動を示すことや、分画した細胞抽出液の水溶性画分中にcCRY4が検出されることがわかった。これらの結果から、cCRY4は光感受性の概日時計組織において青色光を受容する新規の光受容分子であり、ピノプシン等をはじめとする既知の光受容分子とは全く異なる光情報伝達経路に関与している可能性が強く示唆された。

Submit the application to document the implementation plan of the study and record the results. The researchers determined that there was no change in mRNA expression in the pineal gland. This molecule is named LCG, and the full-length cDNA is used to produce specific antibodies, and the stress development system is used to analyze the intracellular structure. LCG is used to analyze the centrosome. The possibility of interaction between LCG and pineal gland is discussed by immuno-sedimentation method. The results, LCG and γ-ray combination were confirmed. The results show that the LCG has the ability to control the activity of the central body. The analysis of LCG is parallel to the discovery of new optical coherence circuits, and new optical receptors are explored. As a result, there is no such thing as a green or blue light receptor. cCRY4 is named and analyzed. As a result, cCRY4 mRNA was expressed in the retina and pineal gland in a light-dependent manner in cultured pineal cells. The production of antibodies specific to cCRY4 and the presence of a number of stromal cells in the pineal gland were determined. The expression of cCRY4 in aqueous extracts of cell extracts was detected in the presence of cCRY4 in the presence of cCRY4 in aqueous extracts of cell extracts. The results show that cCRY4 has a strong possibility of changing the photosensitivity of photoreceptors into photoreceptors with different photoinformation transmission paths.