糖尿病性網膜症の発症機序におけるアポトーシスの関与に関する研究

【方法】Goto-Kakizaki(GK)ラット30匹およびWisterラット10匹をCharles Riverより購入した。GKラットは10匹ずつ3群に分け,糖尿病対照群,抗酸化剤投与群,タンパク糖化阻害剤投与群とした。抗酸化剤投与群には,0.1%αトコフェロール混餌,また飲料水には0.1%アスコルビン酸を混合した。タンパク糖化阻害剤としては,OPB-9195を混餌した。飼育開始時および3ヶ月ごとに空腹時血糖値およびHbA1c値を測定した。9カ月後にGK群および抗酸化剤投与群に経口糖負荷試験をおこなった。また全群の半数を安楽死させ,眼球を摘出した。網膜からトリプシン消化毛細血管標本を作成した。この標本を用いて,In situ cell death detection kit(TUNEL法,Boeringer Mannheim)にてアポトーシス細胞を同定した。TUNEL陽性細胞は蛍光顕微鏡にて確認し計数を行った。【結果】GK群においては網膜毛細血管のTUNEL陽性細胞数はWistar群に比較して有意に増加していた。これに対して,抗酸化剤投与群,タンパク糖化阻害剤投与群ではともにこれを減少させていた。HbA1c値はGK群,抗酸化剤投与群,OPB-9195投与群の間に有意差はなく血糖コントロールへの影響はなかった。研究成果の一部は平成12年の日本糖尿病合併症学会のシンポジウムで発売の予定である。【今後の研究】現在残り20匹(Wistar 5匹,GK 15匹)を継続飼育中であり,18ヶ月になった時点で,安楽死させて9ヶ月時と同様の検討を行う。さらに,片眼は網膜組織切片として,酸化ストレスマーカーやAGEに対する抗体をもちいた免疫組織染色を行う予定である。

【方法】Goto-Kakizaki(GK)ラット30匹およびWisterラット10匹をCharles Riverより購入した。GKラットは10匹ずつ3群に分け,糖尿病対照群,抗酸化剤投与群,タンパク糖化阻害剤投与群とした。抗酸化剤投与群には,0.1%αトコフェロール混餌,また飲料水には0.1%アスコルビン酸を混合した。タンパク糖化阻害剤としては,OPB-9195を混餌した。飼育開始時および3ヶ月ごとに空腹時血糖値およびHbA1c値を測定した。9カ月後にGK群および抗酸化剤投与群に経口糖負荷試験をおこなった。また全群の半数を安楽死させ,眼球を摘出した。網膜からトリプシン消化毛細血管標本を作成した。この標本を用いて,In situ cell death detection kit(TUNEL法,Boeringer Mannheim)にてアポトーシス細胞を同定した。TUNEL陽性細胞は蛍光顕微鏡にて確認し計数を行った。【結果】GK群においては網膜毛細血管のTUNEL陽性細胞数はWistar群に比較して有意に増加していた。これに対して,抗酸化剤投与群,タンパク糖化阻害剤投与群ではともにこれを減少させていた。HbA1c値はGK群,抗酸化剤投与群,OPB-9195投与群の間に有意差はなく血糖コントロールへの影響はなかった。研究成果の一部は平成12年の日本糖尿病合併症学会のシンポジウムで発売の予定である。【今後の研究】現在残り20匹(Wistar 5匹,GK 15匹)を継続飼育中であり,18ヶ月になった時点で,安楽死させて9ヶ月時と同様の検討を行う。さらに,片眼は網膜組織切片として,酸化ストレスマーカーやAGEに対する抗体をもちいた免疫組織染色を行う予定である。