22q.11.2の欠失する複雑心奇形に伴う副甲状腺機能低下症の分子生物学的研究

22q.11.2缺失所致复杂心脏畸形相关甲状旁腺功能减退症的分子生物学研究

• 批准号: 10770357
• 负责人: 南 弘一
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Wakayama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770357/
• 关键词: 22q.11.2; 複雑心奇形; 副甲状腺機能低下症; 分子生物学; 22q11.2

染色体22q.11の欠失する複雑心奇形に伴う副甲状腺機能低下症において、副甲状腺カルシウム感受性受容体の突然変異(ミスセンス変異、欠失、挿入)や転座を検討している。昨年度は研究計画に従って、対象の染色体22q11.2欠失を伴う心奇形例、16例(副甲状腺機能低下症を示す群7例、副甲状腺機能正常群9例)において、Genomic DNAを抽出し、また分離したリンパ球をEB virusに感染させて、リンパ球由来細胞株の樹立を行い、genomic DNAを各種制限酵素で切断後、アガロース電気泳動でDNAフラグメントを分離し、サザンブロット法を行った。全例施行していないが、ヒト副甲状腺カルシウム感受性受容体に対して、サザンブロット法では陽性のバンドを検出できている。またヒト副甲状腺カルシウム感受性受容体に対するセンス・アンチセンスプライマーを利用して、DNA PCRを行い、PCR産物を各種制限酵素で切断し、アガロース電気泳動を行った。正常コントロールを比べて、バンドに差を認めた症例において、現在PCR産物の塩基配列を検索中である。残りの症例でサザンブロット法、DNA PCRを行い、ヒト副甲状腺カルシウム感受性受容体の突然変異の疑い例で塩基配列の決定を行っており、まだ変異を確認していない。

The deletion of chromosome 22q.11 is associated with hypoparathyroidism, sudden changes in parathyroid-sensitive receptors, and analysis of loci. Last year, 16 cases of chromosome 22q11.2 deletion were reported in the study.(Hypoparathyroidism group 7 cases, hypoparathyroidism group 9 cases), Genomic DNA extraction, isolation, EB virus infection, establishment of globular-derived cell lines, Genomic DNA cleavage by various restriction enzymes, Electrophoresis, DNA isolation, and DNA sequencing were performed. The whole case is implemented, the receptive receptors of the parathyroid gland are compared, and the anti-positive receptors of the Sendanbrot method are detected. The use of DNA PCR and PCR products in the detection of parathyroid receptor receptors by various restriction enzymes Normal PCR products are compared with normal PCR products, and the gene alignment of PCR products is analyzed. For example, the detection of DNA fragments, DNA PCR, and parathyroid receptor mutations, the determination of gene alignment, and the identification of gene mutations.