リソソーム膜蛋白質と細胞骨格の相互作用に関する研究

溶酶体膜蛋白与细胞骨架相互作用的研究

• 批准号: 10771294
• 负责人: 藤田 英明
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10771294/
• 关键词: リソソーム; 細胞骨格; 輸送シグナル; アダプター蛋白質

リソソ-ム膜蛋白質(LGP85)の輸送シグナルである細胞質領域に結合する細胞質因子の精製を行ったところ、β-tubulinとHSP90のcomplexが同定されてきた。しかしながら精製した微小管とLGP85細胞質領域の相互作用を、affinity beadsあるいは表面プラズモン共鳴センサ-などを用いて検討を行ったところ特異的な相互作用を示すことはできなかった。次にLGP85の輸送シグナルである細胞質領域とアダプタ-蛋白質(AP-1,AP-2)との相互作用の検討を、affinity beadsあるいは表面プラズモン共鳴センサ-などを用いて行ったところ、LGP85とAP-1の相互作用は輸送シグナルであるロイシン-イソロイシンという配列に依存的であり、この相互作用がリソソ-ム膜蛋白質(LGP85)の輸送に重要であることが示唆された。さらにLGP85の細胞質領域の合成ペプチドの高次構造の解析(NMR、CDスペクトル)を行ったところ、やはりロイシン-イソロイシン依存的に異なる立体構造を取り得る可能性が示唆され、リソソ-ム膜蛋白質の輸送シグナルはその高次構造により機能発現が規定されていることが予想された。さらにリソソ-ムの生細胞内でのダイナミクスをリアルタイムで観察する目的で、LGP85とGFP(green fluorescent protein)のキメラ蛋白質の発現を試みた。現在このLGP85・GFPキメラ蛋白質の安定発現細胞株を用いて種々の薬物や小胞輸送に関わる細胞質因子の発現によるリソソ-ムの形態変化等について検討中である。

The transport of membrane protein (LGP85) is regulated by the purification of cytoplasmic factors bound to the cytoplasmic domain. The complex of β-tubulin and HSP90 is also regulated. LGP85 Cytoplasmic interaction, affinity beads, resonance, and interaction Next, LGP85 is transported to the cytoplasmic domain.(AP-1,AP-2) Interaction between LGP85 and AP-1 Interaction between LGP85 and AP-1 These interactions are important for the transport of membrane proteins (LGP85). The analysis of higher-order structure of LGP85 in the cytoplasmic domain of synthesis (NMR, CD, etc.) shows the possibility of obtaining different three-dimensional structure of LGP85 in the cytoplasmic domain, and the function of membrane protein transport in the higher-order structure of LGP85 in the cytoplasmic domain is specified. In order to detect the protein expression of LGP85 and GFP(green fluorescent protein), we tried to detect the protein expression of LGP85 and GFP(green fluorescent protein) in the cells. Now the LGP85·GFP protein stable development cell line used in the seed, drug and cell transport related to the development of cytoplasmic factors, such as the development of a variety of morphological changes in the study.

项目成果

H.Fujita,M.Himeno et al: ""In vitro Binding Study of Adaptor Protein Complex (AP-1) to Lysosomal Targeting Matif (LI-Motif)."Biochem.Biophy.Res.Commun.. 255. 54-58 (1999)

H.Fujita、M.Himeno 等人：“接头蛋白复合物 (AP-1) 与溶酶体靶向 Matif (LI-Motif) 的体外结合研究。”Biochem.Biophy.Res.Commun.. 255. 54-58

藤田英明: "In Vitro Binding Study of AP-1 to Lysosonal torgeting Motif (LI-Motif)" Biochem.Biophys.Res.Commun.in press. (1999)

Hideaki Fujita：“AP-1 与 Lysosonal torgeting Motif (LI-Motif) 的体外结合研究”Biochem.Biophys.Res.Commun.in press（1999）。