チロシナーゼ分解誘導化合物によるメラノーマ腫瘍形成抑制の分子機構解明

阐明酪氨酸酶降解诱导化合物抑制黑色素瘤形成的分子机制

• 批准号: 21K06556
• 负责人: 藤田 英明
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nagasaki International University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06556/
• 关键词: チロシナーゼ; メラノーマ; メラノサイト; メラノソーム; リソソーム; タンパク質分解; ユビキチン; ユビキチンリガーゼ

（１）B16メラノーマを尾静脈から投与後、3種類のチロシナーゼ分解誘導化合物を腹腔内投与することで肺転移を阻害できるかについて検討したが有意差を示す化合物を見つけることができていない。また、マウスにB16メラノーマを皮下移植し腫瘍を形成させ、3種類のチロシナーゼ分解誘導化合物を腹腔内投与することで抗腫瘍効果を評価したが、現在のところ有意差を示す化合物を見つけることができていない。予備的実験では腫瘍に直接化合物を接種することで、腫瘍形成阻害を確認していたが再現性が得られなかった。（２）チロシナーゼを分解に導く膜結合型ユビキチンリガーゼRNF152の作用分子機構について解析を行なっている。3XFLAG-ユビキチン発現プラスミドを用いることで、感度よくチロシナーゼのユビキチン化を検出で切るようになった。その結果、チロシナーゼユビキチン化にはRNF152の膜結合ドメインを介したチロシナーゼとの相互作用が必須であることを見出した。また、RNF152によりチロシナーゼに付加されるユビキチン鎖タイプ（K48あるいはK63）について検討を行った結果、ユビキチン鎖タイプには特異性がないことが示唆された。さらに、チロシナーゼ同様メラニン合成に関わるメラノソーム膜タンパク質Tyrp-1もRNF152によりユビキチン化されることを見出した。しかしながら、そのユビキチン化効率はチロシナーゼに比べて低い。以上の結果から、RNF152は新規の色素遺伝子であることを提唱していく。（３）カイコ個体を用いたヒトチロシナーゼおよびヒトTyrp-1の大量発現系を確立できた。アフィニティカラムを用いることで、ある程度精製でき、ヒトチロシナーゼについては活性測定が可能となった。マイクロカロリーメーターを用いた化合物との相互作用測定にはもう少し精製純度を高める必要がある。

(1) B16-induced compounds were injected intraperitoneally into the tail vein after administration, and 3 kinds of compounds were induced by decomposition. 3 kinds of decomposition-inducing compounds were administered intraperitoneally to evaluate the anti-tumor effect. In preparation, direct compound inoculation was performed and tumor formation inhibition was confirmed. (2) The molecular mechanism of RNF152 is analyzed in detail. 3XFLAG- As a result, the membrane binding mechanism of RNF152 was found to be necessary for the interaction between RNF152 and RNF152. The RNF152 is the first to be tested for specificity. In addition to the above, we can also find out the reasons for the change in the quality of Tyrp-1 RNF152. The rate of change is lower than the rate of change. As a result of the above, RNF152 is a new pigment gene. (3) A large number of development systems of Tyrp-1 have been established. The activity of the enzyme is determined by the activity of the enzyme. The interaction between the two compounds is necessary for purification.

项目成果

膜結合型ユビキチンリガーゼRNF152によるメラニン産生調節機構

膜结合泛素连接酶 RNF152 对黑色素产生的调节

• 发表时间: 2022
• 作者: 藤田英明;上田亮太;藤井佑樹;高橋宏隆;竹田浩之;澤崎達也;本川智紀;徳永研三
• 通讯作者: 徳永研三

膜結合型ユビキチンリガーゼRNF152によるメラニン産生調節機構に関する研究

膜结合泛素连接酶RNF152调控黑色素生成机制的研究

• 发表时间: 2021
• 作者: Hasyim Ammar A.;Iyori Mitsuhiro;Mizuno Tetsushi;Abe Yu-ichi;Yamagoshi Iroha;Yusuf Yenni;Syafira Intan;Shahnaij Mohammad;Sakamoto Akihiko;Yamamoto Yutaro;Mizukami Hiroaki;Shida Hisatoshi;Yoshida Shigeto;上田 亮太，大園 誠也，藤井 佑樹，高橋 宏隆，竹田 浩之，澤崎 達也，本川 智紀，徳永 研三，藤田 英明
• 通讯作者: 上田 亮太，大園 誠也，藤井 佑樹，高橋 宏隆，竹田 浩之，澤崎 達也，本川 智紀，徳永 研三，藤田 英明

膜結合型ユビキチンリガーゼRNF152によるチロシナーゼのユビキチン化分子機構解明に関する研究

膜结合泛素连接酶RNF152阐明酪氨酸酶泛素化分子机制的研究

• 发表时间: 2022
• 作者: 上田亮太;大園誠也;藤井佑樹;高橋宏隆;竹田浩之;澤崎達也;本川智紀;徳永研三;藤田英明
• 通讯作者: 藤田英明

膜結合型ユビキチンリガーゼRNF152によるチロシナーゼ分解の分子機構解明に関する研究

膜结合泛素连接酶RNF152降解酪氨酸酶分子机制研究

• 发表时间: 2021
• 作者: 上田亮太;大園誠也;藤井佑樹;高橋宏隆;竹田浩之;澤崎達也;本川智紀;徳永研三;藤田英明;上田 亮太，大園 誠也，藤井 佑樹，高橋 宏隆，竹田 浩之，澤崎 達也，本川 智紀，徳永 研三，藤田 英明
• 通讯作者: 上田 亮太，大園 誠也，藤井 佑樹，高橋 宏隆，竹田 浩之，澤崎 達也，本川 智紀，徳永 研三，藤田 英明