新規protein conjugationシステムと共役した小胞輸送機構の解明

阐明与新型蛋白质缀合系统耦合的囊泡运输机制

基本信息

  • 批准号:
    14780549
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.5万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
  • 财政年份:
    2002
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2002 至 2003
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

AAA-ATPaseのひとつであるSKD1とその結合蛋白質が、新規protein conjugationシステムを利用した細胞内小胞輸送(特にエンドソーム・リソソームにおける)を制御しているという作業仮説に基づいて研究を行った。昨年度はSKD1のATPase活性欠損型であるSKD1(E235Q)をアデノウイルスを用いて発現させるシステムを用いて、SKD1がエンドソームを介する様々な小胞輸送の過程に関与していることを明らかにした。さらにSKD1(E235Q)の発現によりリソソーム酵素(cathepsin D)の細胞外分泌も認められ、SKD1の機能異常が酵母細胞におけるいわゆるClass E Vpsのフェノタイプと同じであることを明らかにした。(J.Cell Sci 116(1)401-414(2003))今年度はさらに酵母Two-hybrid法により同定したSKD1結合蛋白質について機能解析を行い、以下の点を明らかにした。(1)SBP1(SKD1 binding protein 1)が酵母Class E Vpsの一つであるVta1pのマウスホモログであることやSBP1/SKD1が巨大複合体を形成することも明らかにした。(2)SBP1のヒトホモログがChediak-Higashi Syndrome原因遺伝子lyst(lysosomal traficking regulator)に結合する蛋白質の一つであり、SKD1(E235Q)発現によりlystの局在が膜画分へと変化することを見い出し、SKD1/SBP1/lyst複合体がエンドソーム膜上で機能している可能性があることを明らかにした。(3)SBP3がユビキチンシグナル依存的膜蛋白質輸送を制御する因子である酵母ESCRT-IIIのサブユニットの一つであるVps2のマウスホモログであることを明らかにした。さらにSBP3のN末側Coiled-coilドメインがSKD1(E235Q)の膜結合に重要であることも明らかにした。(J.Cell Sci(2004),accepted)以上のようにSKD1とその結合蛋白質がユビキチンシステムを含むエンドソーム・リソソームへの小胞輸送において重要な役割を果たしていることを明らかにすることに成功した。
AAA - ATPase の ひ と つ で あ る SKD1 と そ の binding protein が, new rules protein conjugation シ ス テ ム を using し た intracellular vesicular transport (especially に エ ン ド ソ ー ム · リ ソ ソ ー ム に お け る) を suppression し て い る と い う homework 仮 said に づ い を line っ て research た. Yesterday's annual は SKD1 の ATPase activity owe damage type で あ る SKD1 (E235Q) を ア デ ノ ウ イ ル ス を with い て 発 now さ せ る シ ス テ ム を with い て, SKD1 が エ ン ド ソ ー ム を interface す る others 々 な vesicular transport process の に masato and し て い る こ と を Ming ら か に し た. さ ら に SKD1 (E235Q) の 発 now に よ り リ ソ ソ ー ム enzyme (cathepsin D) の exocrine cells も recognize め ら れ, SKD1 の parafunction が yeast cells に お け る い わ ゆ る Class E Vps の フ ェ ノ タ イ プ と with じ で あ る こ と を Ming ら か に し た. (John casteen ell Sci, 116 (1) (2003) 401-414) this year は さ ら に yeast Two hybrid method に よ り with fixed し た SKD1 binding protein に つ い て line function analytical を い, the following point の を Ming ら か に し た. (1) SBP1 (SKD1 binding protein 1) が yeast Class E Vps の a つ で あ る Vta1p の マ ウ ス ホ モ ロ グ で あ る こ と や SBP1 / SKD1 が huge complex を form す る こ と も Ming ら か に し た. (2)SBP1 ヒトホモログがChediak-Higashi Syndrome is a 伝 lyst(lysosomal traficking) A regulator) に す る protein の つ で あ り, SKD1 (E235Q) 発 now に よ り lyst の innings in painting が membrane へ と variations change す る こ と を see い し, SKD1 / SBP1 / lyst complex が エ ン ド ソ ー ム membrane で function し て い る possibility が あ る こ と を Ming ら か に し た. (3) SBP3 が ユ ビ キ チ ン シ グ ナ ル dependence of membrane protein transport を suppression す る factor で あ る yeast ESCRT - III の サ ブ ユ ニ ッ ト の a つ で あ る Vps2 の マ ウ ス ホ モ ロ グ で あ る こ と を Ming ら か に し た. さ ら に SBP3 の N side at the end of the Coiled - coil ド メ イ ン が SKD1 (E235Q) の membrane-bound に important で あ る こ と も Ming ら か に し た. (John casteen ell Sci (2004), accepted) above の よ う に SKD1 と そ の binding protein が ユ ビ キ チ ン シ ス テ ム を containing む エ ン ド ソ ー ム · リ ソ ソ ー ム へ の vesicular transport に お い て important な "を cut fruit た し て い る こ と を Ming ら か に す る こ と に successful し た.

项目成果

期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
A.Umeda, et al.: "Distribution and trafficking of MPR300 is normal in the cells accumulated cholesterol in late endocytic compartments : evidence for early endosome-to-TGN trafficking of MPR300 in NPC fibroblasts"J.Lipid Res. 44. 1821-1832 (2003)
A.Umeda 等人:“在晚期内吞区室中积累胆固醇的细胞中,MPR300 的分布和运输是正常的:NPC 成纤维细胞中 MPR300 早期内体到 TGN 运输的证据”J.Lipid Res。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
M.Yamanaka, K.Imamura, Y.Tanaka, A.Nara, T.Yoshimori, S.Yokota, M.Himeno: "A dominant negative form of the AAA ATPase SKD1/VPS4 impairs membrane trafficking out of endosomal/lysosomal compartments : Class E vps phenotype in mammalian cells"Journal of Cell
M.Yamanaka、K.Imamura、Y.Tanaka、A.Nara、T.Yoshimori、S.Yokota、M.Himeno:“AAA ATP 酶 SKD1/VPS4 的显性失活形式会损害内体/溶酶体区室的膜运输:
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
姫野 勝 他: "エンドソーム・リソソームの形成と維持の分子機構"生化学. 75. 486-491 (2003)
Masaru Himeno 等:“内体和溶酶体形成和维持的分子机制”生物化学 75. 486-491 (2003)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
斉藤 寿仁 他: "ユビキチンファミリーSUMOとタンパク質輸送"実験医学. 21. 1863-1868 (2003)
Toshihito Saito 等人:“泛素家族 SUMO 和蛋白质转运”实验医学 21. 1863-1868 (2003)。
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  • 发表时间:
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  • 作者:
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  • 通讯作者:
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  • 作者:
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  • 通讯作者:
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  • 作者:
    前 佳佑;堀江 正信;藤田 英明;長森 英二
  • 通讯作者:
    長森 英二

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