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リンパ球に発現するアセチルコリン受容体とその生理的役割に関する免疫薬理学的研究

淋巴细胞表达的乙酰胆碱受体及其生理作用的免疫药理学研究

基本信息

批准号：
10771301
负责人：
藤井健志
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Kyoritsu University of Pharmacy
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では,1)リンパ球に発現するムスカリンおよびニコチン受容体,2)ムスカリン受容体刺激による細胞内カルシウムシグナリング機構と転写調節因子c-fos活性化について検討した.実験材料として種々のヒト白血病細胞株およびヒト末梢血より調製した単核白血球を用いた.1)アセチルコリン受容体の解析:reverse transcription-polymerase chain reaction法により解析した.調べたすべてのTおよびB細胞系細胞株,さらに末梢血単核白血球において,ムスカリンおよびニコチン受容体遺伝子が発現していた.2)共焦点レーザー蛍光顕微鏡を用いた細胞内遊離カルシウムイオン動態の解析:カルシウム感受性蛍光色素をT細胞系細胞株CEMおよびB細胞系細胞株Daudiに負荷した後,スライドグラス上に固定した.アセチルコリン受容体に選択的な拮抗薬の存在下および非存在下に,ムスカリン受容体作用薬oxotremorine-M(Oxo-M)を作用させた.細胞内遊離カルシウムイオン濃度変化を,共焦点レーザー蛍光顕微鏡を用いて,経時的かつ空間的に観察した.Oxo-Mにより細胞内遊離カルシウムイオン濃度は上昇した.この上昇作用はムスカリンM3サブタイプ受容体拮抗薬4-DAMPにより選択的に拮抗された.3)転写調節因子c-fos遺伝子発現誘導機構の解析:Oxo-Mは,T細胞系細胞株CEMおよびB細胞系細胞株Daudiにおけるc-fos遺伝子発現を増強した.この作用はムスカリンM3サブタイプ受容体拮抗薬4-DAMPにより選択的に拮抗された.以上の結果より,TおよびBリンパ球には,1)ムスカリンおよびニコチン受容体が存在していること,2)M3サブタイプを介する細胞外から核へのシグナル伝達機構の存在が明らかとなった.Tリンパ球により合成および遊離されたアセチルコリンが,オートクラインあるいはパラクライン的に,TおよびBリンパ球の機能調節に関与している可能性が示唆された.

In this study, we investigated the mechanisms of intracellular regulation and regulation of c-fos activation in response to the stimulation of receptors. Analysis of leukemic cell lines and peripheral blood cells by reverse transcription-polymerase chain reaction. 2) Dynamic analysis of intracellular free space by confocal microscopy: the sensitive pigment of T cell line CEM and B cell line Daudi was immobilized after loading. In the presence or absence of antagonistic agents, the receptor acting agent oxotremorine-M (Oxo-M) acts on the receptor. The concentration of intracellular free radicals in cells changes, confocal microscopy is used, and time-dependent spatial observation is performed. Oxo-M indicates that the concentration of intracellular free radicals in cells increases. 3) Analysis of the mechanism of c-fos gene expression induction of regulatory factors: Oxo-M, T cell line CEM and B cell line Daudi. This action is called M3 receptor antagonist 4-DAMP receptor antagonist. The above results show that: 1) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 2) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 3) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 4) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 5) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 6) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 7) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 8) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 9) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 10) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 11) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 12) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 13) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 14) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 15) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 16) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 17) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 18) the existence of extracellular nuclear receptors in M3 cells; 1 The possibility of adjusting the function of T and B spheres is shown.