変異型GroELを用いたシャペロニンの標的蛋白質結合メカニズムの解析

使用突变体 GroEL 分析伴侣蛋白与靶蛋白的结合机制

• 批准号: 10780369
• 负责人: 溝端 知宏
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10780369/
• 关键词: シャペロニン; 部位特異的変異導入法; 蛋白質フォールディング; GroEL; 蛍光; ストップト・フロー分光法; 分子シャペロン

前年度の研究結果を受け,引き続き今年度では大腸菌由来シャペロニン蛋白質GroELのR231W変異体を用い,標的蛋白質認識に携わるアピカルドメインの構造変化解析を行った。前年度後半においてGroELR231W変異体とATPを混合した際に生じるトリプトファン由来の蛍光スペクトル変化をストップト・フロー蛍光分光光度計で観測した結果,k_<app>=3.9×10^<-2>sec^<-1>という反応速度を持つ蛍光強度増加を観測したが、今年度の実験ではこれに加えて新たに3種の構造変化を示唆する蛍光強度変化を観測することに成功した。これらの強度変化はすべて前年度観測されたものよりも速度定数が速く,また,混合するATPの濃度に依存してその速度定数が変化することが確認された。これらの蛍光強度変化のうち,1種類のみ補助蛋白質とGroESを同時に添加しないと検出されなかったものがあり,この蛍光強度変化はGroEL蛋白質とGroES蛋白質が会合する様子を反映していると思われる。同様の実験をATPではなくADPを用いて行った場合,蛍光強度変化の様子はATPの場合と全く異なり,1種類の蛍光強度変化のみ観測された。このことより,GroELがATPを結合する際にアピカルドメインに引き起こされる構造変化は,ADPが結合する際の構造変化とは基本的に異なっており,この構造変化の違いがGroELのシャペロニンとしての機能を調節する重要な役割を持っていると考えられた。

This year, we conducted structural analysis of E. coli origin, protein development and R231W variant. In the second half of the previous year, GroELR231W was mixed with ATP, resulting in a change in the source of light,k_<app>=3.9×10^<-2>sec, and a change in the intensity of light, resulting in a change in the intensity of light, resulting in a change in the intensity of light<-1>. The intensity of the reaction was measured in the previous year, and the concentration of ATP was determined. The light intensity changes, and one kind of auxiliary protein and GroES are added simultaneously. The light intensity changes, and GroEL protein and GroES protein are combined. The same type of ATP is used in the case of ADP, and the different types of ATP are used in the case of ATP. The structural transformation of GroEL in combination with ATP is essential to the structural transformation of GroEL in combination with ATP.