シャペロニン蛋白質の作用機構に関する速度論的解析

伴侣蛋白作用机制的动力学分析

• 批准号: 07858070
• 负责人: 溝端 知宏
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07858070/
• 关键词: 蛋白質フォールディング; 分子シャペロン; シャペロニン; 熱ショック蛋白質; GroE

大腸菌よりGroE蛋白質を完全に精製するための手順はこれまでに幾つか報告されているが,それらの手順すべてにおいて安定した送液が要求されている。今回購入した送液ポンプは49.9ml/minの高流速で安定に送液が可能な上,2液の混合によるグラジエント送液が可能な機種である。このポンプを使用し,GroE蛋白質を高純度精製した後に主に大腸菌由来のPEPCの構造形成反応におけるGeoEの効果をより詳細に観察した。PEPCはGroEのいわゆる標的となる蛋白質の中でただ一つ,低温でしかGroEと相互作用しない蛋白質である。この低温に限定されたGroEとの相互作用を探る第一歩としてPEPC自身の低温における構造形成反応に関する情報を求めた。25℃においてPEPCの構造形成反応を行うと反応開始後約100秒の時点で大規模なアグリゲーション形成が観測された。一方同じ実験を5℃で行うとこのアグリゲーションはほとんど抑制された。この低温でアグリゲーションが比較的抑制される事実はPEPCの構造形成自身が低温では遅れ,その結果GroEとの相互作用が可能になっていることを示唆する情報といえる。PEPCが他の標的蛋白質と異なる事実がもう一つ解明された。反応溶液中におけるGroEL蛋白質のモル量とPEPCの活性回復率との関連を探ったところ,不思議なことに,かなり低濃度のGroE存在下でPEPCの活性回復率が大幅に向上することが明らかとなった。具体的には,PEPCに対し等量以下(0.5倍モル量)のGroEL存在下でPEPCはほぼ3倍の活性回復率の向上を示し,この活性回復率の増加はGroELがもたらす効果の最大値とほぼ同じ値であった。現在の作用機構ではGroELは1:1の割合で標的蛋白質と結合することが必要条件とされているため,この実験結果は既存の分子機構に大きな疑問を投げかけるものである。

Coliform protein is completely purified, and the process is stable. This time, the liquid delivery rate is 49.9ml/min, and the stable liquid delivery is possible. The mixing of the two liquids is possible. The use of this protein,GroE protein high purity purification, after the main origin of Escherichia coli and the formation of the structure of the reverse, GeoE and the results of detailed observation PEPC is a protein that interacts with GroE at low temperatures. The first step is to explore the interaction between the low temperature and the growth of PEPC itself. At 25℃, the structural inversion of PEPC was observed at about 100 seconds after the inversion began. A party with the same temperature 5℃, the line is not open to the public. This low temperature interaction may be related to the formation of PEPC structures, which may be related to the formation of PEPC structures. PEPC is the target protein of other proteins. The relationship between the amount of GroEL protein and the activity recovery rate of PEPC in the reaction solution was explored. It was unexpected that the activity recovery rate of PEPC increased significantly in the presence of GroEL at low concentrations. Specifically,PEPC increases the activity recovery rate by 3 times in the presence of GroEL, which increases the maximum value of the effect. Now the mechanism of action is GroEL 1:1 and the target protein binding is necessary, and the result is that the existing molecular mechanism is difficult to solve.