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外因系血液凝固阻害因子の内皮細胞および平滑筋細胞表面レセプターの解析

外源性凝血抑制剂的内皮细胞和平滑肌细胞表面受体分析

基本信息

批准号：
10780377
负责人：
日根智恵美
金额：
$ 1.22万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10780377/
关键词：
血液凝固インヒビター内皮細胞平滑筋細胞レセプター

项目摘要

動脈硬化症や他の循環器疾患においては、種々の刺激により血管内での血液凝固反応や平滑筋細胞の増殖が促進され血管閉塞に至る。Tissue Factor Pathway Inhibitor(TFPI)は血液凝固反応の効果的な制御因子であると共に内皮細胞や平滑筋細胞へ結合し様々な作用を及ぼすことがわかってきた。我々はTFPIの内皮細胞との相互作用、並びに我々のグループが見出した平滑筋細胞増殖抑制作用の機序解明のために、これらの細胞表面に存在するTFPIレセプターの実体を明らかにすることを目的として本研究を行った。昨年度、培養平滑筋細胞よりTFPI結合物質候補を分離したので、本年度はこの蛋白質とTFPIの結合様式について解析を行った。同定したTFPI結合物質候補の部分アミノ酸配列は、小胞体に局在する分子シャペロンとしてよく知られるcalreticulinの配列と一致した。Calreticulinはまた、数種の細胞で細胞表面にも存在することが報告されているが、細胞表面における機能については全くわかっていない。そこで、大腸菌を用いて組み換え蛋白質を調製し、表面プラズモン共鳴センサーによりTFPIとの結合様式を検討したところ、両者は低アフィニティーながら特異的に結合することがわかった。その結合部位はTFPIカルボキシ末端近傍に位置する塩基性アミノ酸クラスターであることが確認できた。現在、TFPIの培養平滑筋細胞への結合および増殖抑制作用に対する同定蛋白質の関与を、作製した特異抗体を用いて調べている。

Arteriosclerosis and other circulatory disorders stimulate blood coagulation and smooth muscle cell proliferation in blood vessels. Tissue Factor Pathway Inhibitor(TFPI) is an inhibitor of the effects of blood coagulation reaction and plays an important role in endothelial cell and smooth muscle cell binding. The purpose of this study is to clarify the mechanism of TFPI inhibition on proliferation of smooth muscle cells by studying the interaction between TFPI and endothelial cells and the presence of TFPI on the cell surface. Last year, smooth muscle cells were cultured and TFPI binding substance candidates were isolated. This year, the protein and TFPI binding formula were analyzed. The same is true for TFPI binding substance candidates, and the same is true for cellular molecules. Calretinin is present on several cell surfaces and is reported to function on cell surfaces. The expression of TFPI in E. coli is regulated by protein, and the expression of TFPI in E. coli is regulated by protein. The binding site is located near the end of the TFPI. The binding site is located near the end of the TFPI. Now, TFPI's binding to smooth muscle cells and proliferation inhibition are related to the interaction of isoprotein, and specific antibodies are used to modulate it.