遺伝子学的手法を用いたUV殺菌水処理に伴う光回復現象の解明に関する研究

利用遗传方法阐明与紫外线杀菌水处理相关的光恢复现象的研究

• 批准号: 11750489
• 负责人: 大瀧 雅寛
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Ochanomizu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11750489/
• 关键词: UV処理; DNA抽出; 二量体検出; 大腸菌ファージ; 大腸菌; 光回復; クリプトスポリジウム

UV照射後の二量体検出法の前段階として大腸菌ファージであるDNAファージT4を対象微生物とし、DNA抽出方法の検討を行った.抽出方法として3つの方法を検討した。(1)抽出キット(QIAGEN Lambda System)による方法、(2)UF膜による遠心濃縮,膜ろ過後,90℃の熱によるタンパク破砕による方法、(3)UF膜による遠心濃縮液に(1)で使用した抽出キットを適用する方法、以上の方法の後、アガロースゲルによる電気泳動で核酸が抽出できているかどうを確認した。結果として(1)で抽出したサンプルでは,アガロースゲル電気泳動でバンドが観察されたものの非常に薄かった。この原因は元々50kbのλファージよりDNAを抽出するためのものであり,T4ファージは166kbでλファージと比べて長いため,カラムからの溶出が不十分であったためと考えられる。改善方法として、溶出液の溶出力を上げるために溶出液を温めることが考えられた。(2)で抽出したサンプルでは,アガロースゲル電気泳動でT4ファージのDNAによるバンドが観察されたが,T4ファージよりも大きいサイズでもバンドが観察された。このバンドは宿主菌の遺伝子の一部がろ過膜で除去しきれなかったためと考えられる。従ってこの方法では宿主菌の遺伝子の除去方法に関する改良が必要である。改善方法としては、熱破砕を行う前にDNaseを加え,宿主菌によるDNAを壊してから熱破砕を行えばよいと考えられる。(3)で抽出したサンプルはアガロース電気泳動でバンドが観察されなかった。これは、PEGによる沈殿とSDSによる外被分解の段階で、このキットにおける適用量がT4のDNAに利用できる限界を超えてしまったためと考えられる。また濃縮により全量が少ないため、カラムに吸着させた後の回収率が悪いこと、および(1)と同じ原因が考えられた。以上の検討によりDNA抽出法の確立を行った。

Preliminary stage of two-volume extraction method after UV irradiation Like microorganisms and DNA extraction methods, the DNA extraction method is the same. (1) Extract QIAGEN Lambda System) telecentric concentration method, (2) UF membrane telecentric concentration, after membrane condensation, 90℃ hot sterilization method, (3) UF membrane telecentric concentration After using the liquid (1), the method of extracting the liquid is applicable, and the above method is used.ガロースゲルによるelectrophoresisでnucleic acidがextractionできているかどうをconfirmationした. Result: として(1)でしたサンプルでは,アガロースゲル电気动でバンドが観看されたもののvery thinかった.このreasonは元々50kbのλファージよりDNAをdraw out するためのものであり,T4ファージは1 66kb of でλファージと is longer than べていため,カラムからのsoluble is not very であったためと卡えられる. The method of improvement is to improve the dissolution power of the eluate by using the eluent and the temperature of the eluent. (2) したサンプルでは, アガロースゲル电気动でT4 ファージのDNA によるバンドが観泽されたが, T4 ファージよりも大きいサイズでもバンドが観看された. The remaining part of the host bacteria is removed by passing the membrane through the membrane and removing it. It is necessary to improve the removal method of the host bacteria and the method of removing the host bacteria. The improvement method is としては, hot broken 砕を行う前にDNaseをadded, host bacteria によるDNAを壊してからheat broken 砕を行えばよいとKaoえられる. (3) To draw out the したサンプルはアガロース电気动动でバンドが観看されなかった.これは, PEG による戈堂とSDS による外与多级で, このキットにおけThe applicable amount of T4's DNA is limited and the limit is exceeded.またConcentrated によりFull amount がless ないため, カラムにAbsorbed させたAfter のrecovery rate がいこと, および(1)と同じreason が考えられた. The above discussion is based on the established DNA extraction method.

项目成果

M.Otaki, et al.: "A Study on Aqueous Microorganisms Inactivation by Photocatalytic Reaction"Proc.of Asian Waterqual'99 (7th IAWQ Asia-Pacific Regional Conf.). Vol.1. 281-286 (1999)

M.Otaki 等人：“通过光催化反应灭活水中微生物的研究”Proc.of Asian Waterqual99（第七届 IAWQ 亚太地区会议）。

K.Oguma, et al.: "Photoreactivation of E.coli following Photocatalytic Disinfection"Proc.of Asian Waterqual'99 (7th IAWQ Asia-Pacific Regional Conf.). Vol.1. 352-357 (1999)

K.Oguma 等人：“光催化消毒后大肠杆菌的光再活化”Proc.of Asian Waterqual99（第七届 IAWQ 亚太地区会议）。