同化型硝酸還元酵素遺伝子発現に関与する転写調節因子の同定とクローニング

参与合成代谢硝酸还原酶基因表达的转录调节因子的鉴定和克隆

• 批准号: 11760047
• 负责人: 白石 斉聖
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760047/
• 关键词: 硝酸還元酵素; シスエレメント; DNA結合タンパク質; cDNAクローニング

1,NRゲノム遺伝子上のcis-acting DNA elementの解析ホウレンソウNRゲノム遺伝子上の"AGCTA"配列について、硝酸イオンによるNR誘導に必要な"AGCTA"配列は-261〜-265の領域(NR-2)であることを同定した。またこの領域の直前にあるAT Rich領域も遺伝子発現に不可欠であることを明らかとした。2,硝酸誘導に関与するDNA結合タンパク質の検索NR-2領域の"AGCTA"配列に特異的に結合するDNA結合タンパク質の存在を明らかとした。3,DNA結合タンパク質のcDNAクローニング2で述べたDNA結合タンパク質のcDNAクローニングを行った。酵母One-hybrid法を用いて約30万個の組換え体から10個のポジティブクローンを得た。得られたクローンについて塩基配列を決定し、データベース検索を行った。ホモロジー検索の結果、既知のDNA結合タンパク質は見られなかったが、1つのクローンが未知のタンパク質をコードしていることが明らかとなった。このクローンからタンパク質を発現させ、AGTCA配列を含むオリゴDNAを用いてゲルシフトアッセイを行った結果、このタンパク質がAGTCA配列を特異的に認識していることが明らかとなった。

1。对菠菜NR基因组基因“ AGCTA”序列的NR基因组基因上的顺式作用DNA元件的分析，鉴定硝酸盐离子NR诱导所需的“ AGCTA”序列是-261至-265（NR -2）。还揭示了该区域之前的富区域对于基因表达也是必不可少的。 2。搜索参与硝酸盐诱导的DNA结合蛋白的存在揭示了特异性结合与NR-2区域中“ AGCTA”序列的DNA结合蛋白的存在。 3.进行了2中描述的DNA结合蛋白的DNA结合蛋白克隆的CDNA克隆。使用酵母单杂交法获得了大约300,000个重组者，获得了十个阳性克隆。确定获得的克隆的核苷酸序列，并进行数据库搜索。同源性搜索显示未发现已知的DNA结合蛋白，但一个克隆编码了未知的蛋白质。该蛋白质是从该克隆表达的，并使用含有AgTCA序列的寡核DNA进行凝胶移位测定，并发现该蛋白质专门识别AGTCA序列。