同化型硝酸還元酵素遺伝子発現に関与する転写調節因子の同定とクローニング

参与合成代谢硝酸还原酶基因表达的转录调节因子的鉴定和克隆

• 批准号: 11760047
• 负责人: 白石 斉聖
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760047/
• 关键词: 硝酸還元酵素; シスエレメント; DNA結合タンパク質; cDNAクローニング

1,NRゲノム遺伝子上のcis-acting DNA elementの解析ホウレンソウNRゲノム遺伝子上の"AGCTA"配列について、硝酸イオンによるNR誘導に必要な"AGCTA"配列は-261〜-265の領域(NR-2)であることを同定した。またこの領域の直前にあるAT Rich領域も遺伝子発現に不可欠であることを明らかとした。2,硝酸誘導に関与するDNA結合タンパク質の検索NR-2領域の"AGCTA"配列に特異的に結合するDNA結合タンパク質の存在を明らかとした。3,DNA結合タンパク質のcDNAクローニング2で述べたDNA結合タンパク質のcDNAクローニングを行った。酵母One-hybrid法を用いて約30万個の組換え体から10個のポジティブクローンを得た。得られたクローンについて塩基配列を決定し、データベース検索を行った。ホモロジー検索の結果、既知のDNA結合タンパク質は見られなかったが、1つのクローンが未知のタンパク質をコードしていることが明らかとなった。このクローンからタンパク質を発現させ、AGTCA配列を含むオリゴDNAを用いてゲルシフトアッセイを行った結果、このタンパク質がAGTCA配列を特異的に認識していることが明らかとなった。

1. NRゲノム inherits <s:1> cis-acting DNA on 伝 Element analytical ホ の ウ レ ン ソ ウ NR ゲ ノ ム heritage in の 伝 "AGCTA" match column に つ い て, nitric acid イ オ ン に よ る NR inducing に な necessary "AGCTA match column" は - 261 - - 265 の areas (NR - 2) で あ る こ と を with fixed し た. ま た こ の field の way に あ る AT Rich areas も heritage 伝 son 発 に now do not owe で あ る こ と を Ming ら か と し た. 2, nitric acid induced に masato and す る dna-binding タ ン パ ク qualitative の 検 cable の NR - 2 field "AGCTA" match column に specific に combining す る dna-binding タ ン パ ク qualitative の exist を Ming ら か と し た. 3, the DNA binding タ ン パ ク qualitative の cDNA ク ロ ー ニ ン グ で above 2 べ た dna-binding タ ン パ ク qualitative の cDNA ク ロ ー ニ ン グ を line っ た. The One-hybrid method of yeast を is to exchange about 300,000 cells of を て for え cells ら ら10 <s:1> ポジティブ ロ ロ ロ を を を を を を を を を を to obtain た. Have ら れ た ク ロ ー ン に つ い て salt base with を decided し, デ ー タ ベ ー ス 検 cable line を っ た. ホ モ ロ ジ ー 検 cable の results, both known の dna-binding タ ン パ ク qualitative は see ら れ な か っ た が, 1 つ の ク ロ ー ン が unknown の タ ン パ ク qualitative を コ ー ド し て い る こ と が Ming ら か と な っ た. こ の ク ロ ー ン か ら タ ン パ ク qualitative を 発 now さ せ, AGTCA match column を containing む オ リ ゴ を DNA with い て ゲ ル シ フ ト ア ッ セ イ を line っ た results, こ の タ ン パ ク qualitative が AGTCA match column を specific に know し て い る こ と が Ming ら か と な っ た.