酵母のストレス応答性転写因子YAP-1の活性と局在性のredox制御機構の解析

酵母应激反应转录因子YAP-1活性及定位的氧化还原调控机制分析

基本信息

批准号：
11760061
负责人：
井沢真吾
金额：
$ 0.45万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

出芽酵母Saccharomyces cerevisiaeの酸化的ストレス応答性の転写因子yAP-1のredox regulationについてチオレドキシンおよびグルタレドキシン欠損株(trxlΔ/trx2Δ,grx1Δ/grx2Δ)を用いて検討した。チオレドキシン欠損株では、yAP-1は恒常的に核に局在し活性化されており、チオレドキシンがyAP-1活性にネガティヴに作用することを見い出した。好気的条件下ではチオレドキシン欠損株の細胞内酸化度が野生株より約二倍高いことを明かとした。また、チオレドキシンとyAP-1の欠損が合成致死性を示した。さらに、チオレドキシンを再還元するチオレドキシンリダクターゼ欠損株(trr1Δ)についてもtrx1Δ/trx2Δと同様に、細胞内酸化度の上昇とyAP-1の活性化が観察された。しかしながら、大腸菌の場合とは異なり、S.Cerevisiaeのtrr1Δ株では、全てのチオレドキシンが酸化型として存在するわけではなく、ほぼ半分が依然として還元方で細胞内に存在することを確認した。また、trr1Δでは全チオレドキシン量も上昇していた。これはyAP-1標的遺伝子の一つであるTRX2遺伝子の発現活性化によるとものと考えられた。現在、yAP-1活性のredox regulationにおけるチオレドキシンのredox blanceとチオレドキン含量の影響について検討を行っている。

使用硫氧还蛋白和缺氧蛋白缺陷型菌株（TRXLΔ/TRX2Δ，GRX1Δ/GRX2Δ）研究了酿酒酵母酿酒酵母中氧化应激反应性转录因子YAP-1的氧化还原调节。在缺陷蛋白质缺陷株中，YAP-1在核中局部局部局部和激活，我们发现硫氧还蛋白对YAP-1活性产生负面作用。据表明，在有氧条件下，硫氧还蛋白缺乏菌株的细胞内氧化速率大约是野生菌株的两倍。硫氧还蛋白和YAP-1的缺乏表现出合成的致死性。此外，观察到硫氧还蛋白还原酶缺乏菌株（TRR1Δ），该应变的硫氧还蛋白类似于TRX1Δ/TRX2δ，观察到YAP-1的细胞内氧化和激活增加。然而，与大肠杆菌不同，在酿酒酵母的TRR1δ菌株中，我们证实并非所有硫氧还蛋白都以氧化形式存在，并且几乎一半的细胞内还会降低。此外，在TRR1δ处的硫氧还蛋白的总量增加。这被认为是由于TRX2基因的表达激活，TRX2基因是YAP-1靶基因之一。目前，我们正在研究硫氧还蛋白氧化还原氧化氧化氧化还原和硫氧还蛋白含量对YAP-1活性的氧化还原调节的影响。