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チオレドキシンシステムの核移行と同システムによる核外輸送のレドックス制御機構

硫氧还蛋白系统的核转位及同一系统的核输出氧化还原控制机制

基本信息

批准号：
13760064
负责人：
井沢真吾
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

核内チオレドキシンシステムの一部、酵母核チオレドキシンペルオキシダーゼDot5は、その生理機能が明らかにされていない。そこで、DOT5遺伝子破壊株、DOT5過剰発現株を構築し、核内レドックス制御や酸化的ストレス応答について検討した。遺伝子破壊株dot5ΔおよびDOT5過剰発現株とも、野生株と同様の酸化的ストレス(過酸化水素およびt-ブチルヒドロペルオキシド)に対する感受性・適応能を示した。また、核外輸送配列NESを付加し細胞質側で発現させたDOT5-NESによる抗酸化能についても検討を行った。細胞質チオレドキシンペルオキシダーゼTsa1、Tsa2、Ahp1欠損によるストレス高感受性に対するDOT5-NES過剰発現の抑圧効果を検討したが、顕著な影響は観察されなかった。以上の結果から、核局在型チオレドキシンペルオキシダーゼDot5の持つ抗酸化能は非常に軽微なものであると考えられた。また、核内のレドックスバランス維持に与えるDot5影響についても検討した。核内のレドックスバランスを直接測定することが困難なため、酸化的ストレス応答性の転写因子Yap1の活性と細胞内局在を指標に解析を行った。遺伝子破壊株dot5ΔおよびDOT5過剰発現株、およびDOT5-NESを過剰発現したグルタチオンペルオキシダーゼ欠損株gpx3ΔのいずれにおいてもYap1の活性・細胞内局在に対する影響は観察されなかった。その他、ゲノムDNA損傷に対する影響についてもTUNEL法などで検討したが、Dot5単独での核内レドックス制御への影響は小さいものと考えられた。Dot5単独では有意な影響が観察されなかったことから、核内のレドックスバランスや酸化的損傷に対する防御は細胞質側でおこなわれるストレス防御やレドックス制御と密接に連携していると予想された。

A part of the nuclear control system, yeast nuclear control system, Dot5, and the physiological function of the system are clearly defined. DOT5 gene mutation, DOT5 gene mutation, and DOT 5 gene mutation were detected by DNA sequencing. The sensitivity and adaptability of the mutant strain dot5 and the wild strain to acidification were demonstrated. In addition, the extracellular transport of NES was enhanced and the development of DOT5-NES was discussed. Cytoplasmic degradation of Tsa1, Tsa2, Ahp1 due to high susceptibility to DOT5-NES and the effect of inhibition on cell growth was investigated. The above results show that the NPA has a very good anti-acidification ability in the form of a small number of samples. In addition, the core of the core. The activity of Yap1, a key factor in the regulation of nuclear activities, was analyzed by direct measurement of the activity of Yap1, a key factor in the regulation of nuclear activities Dot5 Δ and DOT5-NES were detected in the cells of Gpx3 Δ and the effects of Yap1 activity and intracellular regulation were observed. The effects of DNA damage on the DNA system are discussed in detail in the Tunel method. Dot5: Involuntary effects on nuclear defense against damage caused by acidification on the cytoplasmic side of the nucleus.