ストレス応答における核内チオレドキシンによるmRNA核外輸送のredox制御機構

应激反应中核硫氧还蛋白mRNA核输出的氧化还原控制机制

基本信息

批准号：
14035229
负责人：
井沢真吾
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

出芽酵母Saccharomyces cerevisiaeを用いて、ストレス条件下におけるmRNA核外輸送の制御機構について解析を行った。エタノールストレス条件下やチオレドキシン欠損株trx1Δtrx2Δにおける酸化的ストレス条件下でのmRNAの局在を、oligo dT probeを用いたin situ hybridizationで観察したところヒートショックストレスと同様に大部分のmRNAは核外輸送が阻害され核内への蓄積が観察された。その一方で、ヒートショックプロテインをコードするSSA4遺伝子のmRNAは優先的に核外輸送されることが確認された。また、mRNA核外輸送因子の細胞内局在についてGFP融合タンパク質を用いて観察した。エタノールストレス条件下ではGle1やGle2については核膜上から細胞質側に移動することや、Mex67などは核膜内に拡散することが確認された。また、同じ出芽酵母Saccharomyces cerevisiaeでも実験室酵母と清酒醸造用の協会酵母では、mRNA核外輸送抑制が開始されるエタノール濃度に顕著な違いが観察された。各種の酵母について検討した結果、エタノール耐性とmRNA核外輸送制御との密接な相関が観察された。さらに、エタノールによるmRNA核外輸送抑制が核膜の流動性に起因している可能性を見い出した。膜脂質の組成や流動性を変化させる各種の条件下では、エタノールによるmRNA核外輸送抑制を改善することを確認した。マイクロアレイ解析とプロテオーム解析を組み合わせて、エタノール条件下で優先的に核外輸送されるmRNAの同定を進行中である。

使用酿酒酵母的发芽酵母菌在应力条件下控制mRNA核输出的机制。使用Oligo DT探针，通过原位杂交观察mRNA在乙醇应激条件下的定位和硫氧还蛋白缺陷菌株TRX1ΔTRX2δ中的氧化应激条件。与热休克应激一样，大多数mRNA被抑制在核输出中，并观察到核中的积累。另一方面，已经证实，编码热休克蛋白的SSA4基因的mRNA优先运输核。另外，使用GFP融合蛋白观察到mRNA核输出因子的亚细胞定位。有人证实，GLE1和GLE2在乙醇应激条件下从核膜迁移到细胞质侧，而MEX67和其他人则扩散到核膜中。此外，在同一发芽的酵母菌酿酒酵母中，在乙醇浓度中观察到了显着差异，在乙醇浓度中，在实验室酵母和酵母菌酵母之间启动了以酿造的mRNA核出口抑制作用。由于各种酵母研究，观察到乙醇抵抗与mRNA核转运控制之间的密切相关。此外，我们发现乙醇对mRNA核输出的抑制可能是由于核膜的流动性。已经证实，在改变膜脂质的组成和流动性的各种条件下，乙醇对mRNA核转运的抑制得到改善。当前正在进行与蛋白质组学分析结合的微阵列分析，以鉴定在乙醇条件下优先核传输的mRNA。