軟体動物トロポニンIのN端伸長領域の存在意義の研究

软体动物肌钙蛋白I N端延伸区意义的研究

• 批准号: 11760144
• 负责人: 田中 啓之
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760144/
• 关键词: 軟体動物; 筋収縮調節蛋白質; トロポニンI; Ca結合蛋白質; 筋収縮調節タンパク質; Ca^<2+>結合タンパク質

1.ホタテガイ類TnIの一次構造と機能の相関の検討アカザラガイTnIのcDNAを鋳型として種々の領域をPCR増幅し、それらを発現ベクターに組み込んで大腸菌によるTnI断片発現系を構築した。現在、N端伸長領域を含む断片の発現には至っておらず、脊椎動物TnIと相同性を示すC端側の領域に含まれる残基130-292、残基130-252および残基231-292の領域について発現を行った。さらにこれらの領域に相当するウサギTnIの領域についても同様にして発現系を構築した。これらの断片のTnCとの結合能を比較した結果、残基231-292について、ウサギTnIではCa依存的な強い結合が認められるのに対し、アカザラガイTnIでは全く結合しないなどの大きな相異が認められた。従って、アカザラガイTnIの収縮調節における作用機構は脊椎動物TnIのそれとは異なっていることが示唆された。2.N端伸長領域と相互作用する蛋白質の酵母Two-Hybrid systemによる検索アカザラガイTnIのN端伸長領域にあたる残基1-129、脊椎動物TnIと相同性を示す残基130-292およびTnC結合部位である残基130-183の領域をコードするDNAを調製し、それらをpHybLex/Zeoベクターに組み込んで酵母EGY48(pSH18-34)を形質転換した。さらにそれらをpYESTrp2ベクターに構築したアカザラガイ横紋筋cDNAライブラリーで形質転換し、Leu非要求性およびLacZの発現を指標として、上述の領域と相互作用する蛋白質を検索した。その結果、残基130-292に関してはTnCおよびTnTが、残基130-183に関してはTnCが相互作用蛋白質として検出されるなど予想通りの結果が得られる一方で、N端伸長領域である残基1-129に関しては相互作用蛋白質を検出するには至らなかった。

1. For the first time, the TnI system can be used to measure the size of the PCR in the field of TnI and cDNA, and to detect the size of the PCR in the field. The TnI fragments are in the system. At present, the N-terminal extension field contains fragments and TnI homogeneity, indicating that the C-terminal domain contains halogen residues 130,292,130,252 and 231-292, respectively. There is a lot of money in the field of TnI. The same thing is true. The combination of TnC fragments can be used to compare the results, residues 231-292, the strength of the Ca-dependent fragments of TnI fragments, the combination of fragments and TnI fragments, and the combination of fragments and fragments. The organ that acts on the vertebrae, the TnI, the TnI, the spinal cord, the spinal cord, the spine, the spine, the spine 2. The N-terminal elongation domain interaction protein, yeast Two-Hybrid system protein, the N-terminal elongation domain, the TnI homology of the vertebrate TnI, and the homology of the vertebrate TnI showed that the binding site of the TnC binding site, the amino acid residue 130-183, was highly conserved. The yeast EGY48 (pSH18-34) was isolated from yeast pHybLex/Zeo. This is not true because of the fact that the cross-bar cDNA is not required. The Leu is not required. The LacZ is not required. The above-mentioned domain interaction is known to be known as the domain interaction. The results showed that the interaction proteins of residues 130,292 and 130,183,130,183,13,292, TnC and TnC, respectively, showed that the nucleotides were sequenced, and the N-terminal elongation domain of amino acid residues 1-129. the interaction proteins were isolated from one side to the other.