イガイ類の付着機構に関する生化学的研究

贻贝附着机制的生化研究

• 批准号: 15780139
• 负责人: 田中 啓之
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15780139/
• 关键词: ムラサキイガイ; 足糸タンパク質; 付着; Two-Hybrid System; 付着生物; イガイ; 足糸; アカザラガイ; チロシナーゼ; カテコールオキシターゼ; DOPA

イガイ類の付着は足から分泌されるタンパク質が硬化して形成される足糸によって行われる。この足糸タンパク質は、生合成から分泌に至るまでの間に細胞内で様々な翻訳後修飾を受けることが知られている。本研究では、翻訳後修飾に関わる酵素や分泌に関与するタンパク質を明らかにするため、足糸タンパク質と相互作用するタンパク質を、酵母Two-Hybrid systemを用いてスクリーニングすることにした。函館湾においてイガイ類を採取し、まず、既報のPCR法によって種の同定を行った。その結果、採取した10個体はいずれもムラサキイガイであることを確認した。次に、そのうち1個体の足よりmRNAを分離してcDNAの合成を行った後、PCRによって2種類の足糸タンパク質(MGFP1およびMGFP2)をコードするcDNAの増幅を行った。MGFP1-cDNAの増幅産物については、様々なサイズを示したが、5'端側から分析した部分塩基配列はいずれも相同で、既報の配列にほぼ一致した。一方、MGFP2-cDNAの増幅産物についても、様々なサイズのものが得られ、同様に5'端側の相同性は高かったが、3'端側の繰り返し領域は、繰り返し単位の欠損や重複により、少なくとも3つの配列パターンに分類されることがわかった。さらに、これらのアイソフォームは異なる複数の遺伝子にコードされていることが示唆された。これらの結果は、MGFP2の基本構造が種を超えて保存されているとする既報の知見とは異なっていた。また、配列も既報のものとはアミノ酸配列レベルで約85%の相同性を示すに留まり、異なっていることがわかった。さらに、MGFP1およびMGFP2をコードするこれらのcDNAをBaitベクターにサブクローニングする一方、cDNAライブラリーをPreyベクターに構築して酵母Two-Hybrid systemによるスクリーニングの準備をした。

The first step is to prevent the formation of a new type of bacteria. This is the first time that we've seen this. In this study, the enzyme secretion and protein interaction between yeast and yeast Two-Hybrid system were studied. Hakodate Bay, Japan, the United States, the United States, the United States The result is that 10 individuals have been identified. After mRNA isolation and cDNA synthesis, PCR amplification was performed for two types of cDNA (MGFP1 and MGFP2). MGFP1-cDNA amplification products are shown in reverse, 5'-end analysis, partial nucleotide alignment, and reported alignment. One side, MGFP2-cDNA amplification product, two side, three side, four side In addition, the number of children in the family is different from that in the family. As a result, the basic structure of MGFP2 was preserved and reported differently. About 85% of the similarity between the two groups is shown in the table below. MGFP1 and MGFP2 are the two main components of the Two-Hybrid system.