サイクリン依存性キナーゼインヒビターによる中枢神経軸索伸展阻害物質の抑制

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂对中枢神经轴突生长抑制剂的抑制

• 批准号: 04J08189
• 负责人: 田中 啓之
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J08189/
• 关键词: サイクリン依存性キナーゼインヒビター; 中枢神経再生; 軸索伸展阻害物質

p21は通常の状態では細胞の核内に存在することが知られているが、幼若な神経細胞においては分化時にその局在を核内から細胞質へと変化させることを過去に報告してきた。そこで本年度はp21の局在の核外移行メカニズムについての研究を行った。p21にはnuclear localization signal(NLS)が存在することが知られており、そのなかのT145(145番目のスレオニン残基)がリン酸化されることによって核外へ移行するという報告があるため、まず追試を行った。またNLSに存在するその他のリン酸化部位の変異体も作製し、実験を進めた。HEK293T細胞を用いてGFP付きのベクターを用いて強制発現を行ったところ、NLSを除去したp21のコンストラクトではほぼすべての細胞でp21の核外移行が認められた。T145、S146(146番目のセリン残基)の擬似リン酸化変異体では核外移行率が上昇したものの、ともに50%程度の核外移行率であった。またT148(148番目のスレオニン残基)、S153(153番目のセリン残基)、S160(160番目のセリン残基)の擬似リン酸化変異体ではほとんど変化は認められなかった。次に核外移行率が高かったT145、S146の両部位の擬似リン酸化変異体を作製したが、核外移行率の有意な上昇は認められなかった。その他の2部位の組み合わせの擬似リン酸化変異体でも有意な変化は認められなかった。

State of p21 は usually の で は cells exist に す の nuclear る こ と が know ら れ て い る が, young if な god 経 cells に お い て は differentiation に そ の bureau within を nuclear か ら cytoplasm へ と variations change さ せ る こ と を past に report し て き た. Youdaoplaceholder0 った で で this year, the <s:1> p21 <s:1> bureau will conduct メカニズムに て て <s:1> research を outside the <s:1> nucleus った. Youdaoplaceholder5. P21 に は nuclear localization signal (NLS) が す る こ と が know ら れ て お り, そ の な か の T145 (145 times eye の ス レ オ ニ ン residues) が リ ン acidification さ れ る こ と に よ っ て nucleus へ transitional す る と い う report が あ る た め, ま ず line after try を っ た. Youdaoplaceholder0 NLSに exists in するそ <s:1> his <s:1> リ the <s:1> acidified site <e:1> of the <s:1> variant <s:1> is involved in the production <s:1> and experimental を into めた. HEK293T cells を using い て GFP pay き の ベ ク タ ー を with い て forced 発 line now を っ た と こ ろ, NLS を remove し た p21 の コ ン ス ト ラ ク ト で は ほ ぼ す べ て の cells で p21 の nucleus transitional が recognize め ら れ た. T145, S146 (146 times eye の セ リ ン residues) の quasi リ ン acidification - variant で は nucleus migration rate rising が し た も の の, と も に 50% degree の transition rate of extranuclear で あ っ た. ま た T148 (148 times eye の ス レ オ ニ ン residue), S153 (153 times eye の セ リ ン residue), S160 (160 times eye の セ リ ン residues) の quasi リ ン acidification - variant で は ほ と ん ど variations change は recognize め ら れ な か っ た. High time に transition rate of extranuclear が か っ た T145, S146 の struck parts の quasi リ ン acidification - variant を cropping し た が, nuclear migration rate rising の intentionally な は recognize め ら れ な か っ た. Youdaoplaceholder0 <s:1> he <s:1> the two parts of the <s:1> group み combined わせ <s:1> mimic リ <s:1> acidified variant で そ intentional な transformation <e:1> recognize められな リ った った.