虚血性心筋障害モデルによるリン脂質膜破綻の解析

缺血性心肌损伤模型磷脂膜破裂分析

• 批准号: 11760214
• 负责人: 松木 直章
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760214/
• 关键词: 心筋; 虚血; フリーラジカル; 試験管内モデル; リン脂質; 膜障害

虚血性心疾患における心筋細胞膜障害のメカニズムについて検討するため、まず株化細胞を用いた試験管内モデルを確立した。すなわち、マウス由来C2C12細胞ならびにラット由来H9C2細胞の解糖系をヨード酢酸にて阻害し、さらにロテノン、シアンによりミトコンドリア呼吸鎖を阻害した。この実験系を用い、共焦点レーザー顕微鏡的方法で膜構造の変化を解析するとともに、常法を用いて細胞内アデノシン三リン酸、カルシウムイオン濃度、フリーラジカルならびに脂質過酸化反応産物を経時的に測定した。その結果、虚血処理開始5分後には細胞内アデノシン三リン酸が枯渇し、引き続いてフリーラジカル産生と脂質過酸過反応産物が増加し、やや遅れて細胞内カルシウム濃度が上昇し、その後(処置開始後90〜120分後)に細胞死が観察された。形質膜や小胞体の縮合(クラスタリング)の経時的変化は脂質過酸過反応産物の増加と平行して生じ、さらにスビントラップ剤の添加により抑制されたことから、この形態学的変化には膜リン脂質の酸化的変性が大きく関与すると推察された。また、形質膜の突出(ブレビング)は主に細胞質内カルシウム濃度の上昇後に生じており、カルシウムチャネル阻害剤により一部が抑制された。これらの結果は、膜の縮合と突出がそれぞれ別個のメカニズムで生じることを示唆し、フォスフォリパーゼA2阻害剤はブレビングを抑制するが膜リン脂質の酸化をむしろ亢進させるという過去の実験結果とも矛盾しなかった。フリーラジカル産生と脂質過酸過反応産物の増加は細胞内カルシウム濃度上昇やブレビングに先行して生じており、今後心筋細胞の虚血細胞死を研究するにあたり、優先的に解決すべき問題であると考えられた。

Blood heart disease in the heart muscle cell membrane damage in the detection of the disease, cell culture in the detection of the disease in the tube It is derived from C2C12 cells and from H9C2 cells, and is resistant to acid and respiratory lock. This is done by using confocal microscopy to analyze membrane structure, and by using conventional methods to measure intracellular concentrations of lipids, lipid peroxidation products, and lipid peroxidation. As a result, intracellular lipid peroxidation increased 5 minutes after the start of the treatment, intracellular lipid peroxidation increased 5 minutes after the start of the treatment, and cell death was observed 90 to 120 minutes after the start of the treatment. The changes in the morphology of membrane vesicles during condensation are related to the increase of lipid peroxidation products, the inhibition of lipid peroxidation products by the addition of lipid peroxidation agents, and the changes in morphology of membrane vesicles during lipid acidification. The plasma membrane protrusion mainly caused by the increase of the concentration of cytosol and the inhibition of the production of cytosol. This result is due to the fact that the condensation and protrusion of membranes can be caused by other membrane membranes, and the inhibition of membrane lipid acidification by Fumigree A2 can increase the acidification of membrane lipids for several years. This is contradictory to past actual results. The increase of lipid peroxidation products and intracellular lipid peroxidation is the first step in the study of myocardial cell death.