発生期における心筋Ca^<2+>チャネルの構造と機能の特徴に関する検討

发育期心肌Ca^<2+>通道结构与功能特征的研究

• 批准号: 11770026
• 负责人: 山田 陽一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770026/
• 关键词: ラット; 心筋; Ca^<2+>チャネル; 発生学; 電気生理学; 分子生物学

前年度にクローニングに成功しなかったα_<1c> subunitの全長のクローニングを行った。3つのsplice variantが得られ、一つのタイプで出生前後で発現量の変化が見られた。β subunitもクローニングに成功したが、ラットの心臓から得られた遺伝子の配列は人の心臓から得られたβ_<2c>とほぼ同じ配列のものであり、従来からラット心筋で発現していると報告のあるβ_<2a>とは異なるものであった。これらのsplice variantの機能の違いをみるため、in vitroでmRNAを作成し、Xenopus Oocyteに注入して電流の観察を試みた。しかし、電流量の小さいレコードしか得られず、Oocyteに内因性に存在するCa電流との分離が困難であった。そこで、Oocyteに発現させて大きな電流を得る方法として、Xenopusのβグロビンの5'UTRを含んだベクターにのせ換えようと試みている。また、mammalian cell(COS-7)で発現させ、パッチクランプ法で電流を観察すべく、COS-7の培養を開始し、3つのsubunitすべてをほ乳類細胞の発現ベクターにのせ換えようと試みている。

The previous year's launch was successful and the α_<1c>subunit's full length launch was successful. 3. Splice variant is obtained, and a change occurs before and after birth. The beta subunit <2c>was successfully separated from the beta subunit by the beta subunit and the beta subunit was separated from the beta subunit by the beta subunit<2a>. The function of this splice variant is detected by mRNA production in vitro and by Xenopus Ocyte injection. In addition, the current amount is small and the separation of Ca current is difficult due to the inherent existence of Oocyte. The method of generating large currents in Xenopus includes: The development of mammalian cells (COS-7), the detection of currents by the "kokuchi" method, the initiation of COS-7 culture, and the development of mammalian cells by the "kokuchi" method are described in detail below.