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胚性腫瘍細胞F9の分化における12-リポキシゲナーゼの役割の解明

阐明12-脂氧合酶在胚胎肿瘤细胞F9分化中的作用

基本信息

批准号：
11770063
负责人：
鈴木啓史
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

F9細胞と同様にマウス胚性腫瘍細胞であるP19細胞を、0.3μMレチノイン酸で処理して神経細胞に分化させた後に、その細胞破砕液を放射標識アラキドン酸と反応させた。得られた生成物を薄層クロマトグラフィーと逆相およびキラル相の高速液体クロマトグラフィーを用いて、12-リポキシゲナーゼ産物である12S-HETEと同定した。さらに、心筋細胞、骨格筋細胞に分化させるべく、0.003μM.0.03μMレチノイン酸でP19細胞を処理して同様の解析を行ったところ、主要な産物としての12S-HETE以外に、少量の15S-HETEと5-HETEが認められた。一方、現在マウスで発現が認められている全てのリポキシゲナーゼのプローブを調製して、RT-PCR法とRNase Protection法を用いて各リポキシゲナーゼのmRNA発現量を調べた。0.3μMレチノイン酸で処理したP19細胞では一過性に血小板型12-リポキシゲナーゼのmRNAが、また未分化のP19細胞では白血球型12-リポキシゲナーゼmRNAが、そして、0.03μMレチノイン酸で処理したP19細胞では一過性に5-リポキシゲナーゼのmRNAの発現上昇が認められた。白血球型12-リポキシゲナーゼはアラキドン酸を12S-HETE以外に、少量の15S-HETEに代謝することが知られており、各リポキシゲナーゼのmRNAと酵素反応産物の生成量の時間的経過はよく一致することが示された。いずれのリポキシゲナーゼも、神経突起の伸長などの形態変化の直前に発現のピークを示しており、細胞分化への関与が示唆された。ETYA,NDGAなどのリポキシゲナーゼ阻害剤でP19細胞を処理したところ、0.1μM以下の低濃度で細胞死が引き起こされ、分化への影響を調べることはできなかった。

F9 cells are the same as embryonic tumor cells and P19 cells, and 0.3μM レチノイン acid is used. After the differentiation of the nerve cells, the cells were broken down and the radioactive labeling was carried out, and the reaction was carried out. Obtain the られた product を thin layer クロマトグラフィーと reverse phase およびキラルphase の high-speed liquid クロマトグThe ラフィーを uses いて, and the 12-リポキシゲナーゼ product 12S-HETE is the same as the した.さらに, cardiomyocyte, bone lattice cell differentiation させるべく, 0.003μM. 0.03μM レチノイン acid and P19 cells を treatment して Same The main products are 12S-HETE and 15S-HETE, and the main products are 15S-HETE and 5-HETE. On the one hand, the current マウスで発appears to recognize the められている全てのリポキシゲナーゼのプローブをmodulated して, RT-PCR method and RNase The protection method is used to adjust the current amount of mRNA in each reagent. P19 cells were treated with 0.3 μM leuconic acid and transient platelet type 12-リポキシゲナーゼのmRNAが、またUndifferentiated P19 cells ではLeukocyte type 12-リポキシゲナーゼmRNAが, そして, 0.03μM レチノイン acid treatment したP1 9 cells are transiently infected with 5-リポキシゲナーゼのmRNA and are now rising. Leukocyte type 12-リポキシゲナーゼはアラキドン acid を12S-HETE and a small amount of 15S-HETE metabolized することThe time and amount of production of each mRNA and enzyme reaction product are consistent with each other.いずれのリポキシゲナーゼも, 神経 protrusion の elongation などの form changing の straight The former に発appears and the のピークをshows the しており, and the cell differentiation への关 and the がashi instigates the された. ETYA, NDGA などのリポキシゲナーゼblocking agent P19 cells を treatment したところ, 0. Low concentrations below 1 μM can induce cell death and influence differentiation, and can regulate the effects of cell death.