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ブタ白血球アラキドン酸12-リポキシゲナーゼの自殺的失活の機構の解析

猪白细胞花生四烯酸12-脂氧合酶自杀失活机制分析

基本信息

批准号：
08780591
负责人：
鈴木啓史
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト血小板とブタ白血球の2種の12-リポキシゲナーゼのアイソザイムを、^<14>Cで標識したアラキドン酸の種々のヒドロペルオキシあるいはヒドロキシ誘導体と反応させ、酵素活性に与える影響と酵素蛋白に取り込まれる放射活性を、好気条件下と嫌気条件下で比較検討したところ、以下の知見を得た。1)アラキドン酸との反応で,白血球型の酵素が12-ヒドロペルオキシン酸に加えてその約10分の1量の15-ヒドロペルオキシ酸を生成するのに対し、血小板の酵素は約100分の1量しか生成しなかった。2)15-ヒドロペルオキシ酸の14,15-ロイコトリエンA4への代謝速度は、血小板の酵素では白血球型の酵素の約10分の1であった。3)15-ヒドロペルオキシ酸の存在下で、白血球型の酵素はほぼ1分以内で約80%失活したが、血小板型の酵素は3分で約30%しか失活しなかった。4)好気的条件下のみならず、嫌気的にも、15-ヒドロペルオキシ酸の放射活性は白血球型の酵素蛋白に数分間で急速に取り込まれ、酵素蛋白に対しモル比はほぼ1:1であった。5)血小板型の酵素に対しては、このような急速で定量的な15-ヒドロペルオキシ酸の取り込みは見られなかった。6)15-ヒドロペルオキシ酸と反応させた白血球型の酵素蛋白をレーザーイオン化質量分析法で解析した結果から、15-ヒドロペルオキシ酸あるいはその誘導体が、酵素分子内に取り込まれていることが推定された。以上の知見により、白血球型12-リポキシゲナーゼの″自殺的失活″と関連して、アラキドン酸から生成した15-ヒドロペルオキシ酸がさらに14,15-エポキシ酸に代謝され、そのエポキシドが開裂し酵素蛋白に共有結合することが示唆され、合成品を使って確認すべく検討中である。

Platelet count, white blood cell count, two types of platelet count, white blood cell, platelet count, white blood cell, white blood cell, platelet, white blood cell, platelet, platelet, white blood cell, white blood cell, platelet, white blood cell, white blood cell C-labeling methods are used to determine the radioactivity of the enzyme protein, the activity of the enzyme, the radioactivity of the enzyme protein, the radioactivity of the enzyme protein and the radioactivity of the enzyme protein. 1) Leukocyte-type enzyme (12-10), platelet enzyme (100), platelet enzyme (100) and platelet enzyme (100). 2) the speed of A4 generation, platelet enzyme and white blood cell enzyme is about 10 minutes and 1 percent, respectively. 3) the presence of 15-carboxylic acid, about 80% inactivation of leukocyte-type enzymes within 1 min, and about 30% inactivation of platelet enzymes within 1 min. 4) under good conditions, the number of red blood cell enzyme protein and the number of white blood cell enzyme protein were rapidly selected and compared at 1:1 under good conditions. 5) Platelet enzyme, platelet enzyme and platelet enzyme. 6) the results were analyzed by quantitative analysis of white blood cell-type enzyme protein in the presence of 15-phenotypic acid reaction. the results were analyzed by quantitative analysis, and the results were analyzed by the quantitative analysis method. The above information shows that the leukocyte type 12-phenotypic acid is inactivated, the white blood cell type 12-phenotypic acid is inactivated, the acid acid is generated, and the enzyme protein is activated, and the synthetic product is used to confirm the activity of the enzyme protein.