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二重のプロモーターに支配されるセリンアミノ転移酵素遺伝子の転写開始機構

双启动子控制的丝氨酸转氨酶基因转录起始机制

基本信息

批准号：
11770059
负责人：
内田千晴
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

セリン:ピルビン酸アミノ転移酵素(SPT)遺伝子のプロモーター解析の結果、以下が明らかとなった。二つの転写開始部位のうち、ペルオキシソーム局在型SPTの合成を担う下流側開始部位(+66)を支配するプロモーター領域は+21〜+90と同定された。HepG2細胞を用いたゲルシフト解析およびCATリポーター解析(変異導入解析を含む)の結果、この領域内に存在する一カ所のinverted repeat配列と、三カ所のC/EBP配列が下流プロモーター活性に寄与していることが示された。inverted repeat配列に結合するタンパク因子は同定できていないが、C/EBP配列にはC/EBPα及びC/EBPβが結合する。そこでC/EBPαまたはC/EBPβの過剰発現を行うと、どちらもCATリポーターの活性を顕著に増強し、この効果はC/EBP特異的ドミナントネガティブ体の共発現で阻害された。ミトコンドリア型SPTの合成を担う上流側転写開始部位(+1)のみを持つSPT遺伝子断片を用いたルシフェラーゼリポーター解析からは、-125〜-89と-14〜+10の領域が上流側プロモーター活性に寄与することが分かった。-14〜+10内にはAP-2認識部位様配列が存在する。この領域への核タンパク質結合は抗AP-2β抗体の共存による阻害が顕著であった。またAP-2βの過剰発現により、上流プロモーターのbasal活性のみが著しい上昇効果を受けた。一方、-125〜-89内のSp1認識部位様配列にはSp1が結合することが分かった。この部位の変異によりその結合阻害と上流プロモーター活性の低下が観察される。またDNA結合領域のみから成るSp1欠失体の過剰発現によっても活性の低下がみられる。野性型Sp1の過剰発現は上流プロモーターのbasalとPKA(protein kinase A)-induced活性の両方を上昇させ、この効果は転写コアクチベーターCBPの共発現によりさらに強められた。CBPの関与はadenovirusE1Aの共発現により阻害を受けることからも確かめられた。

The results of the analysis of SPT gene are as follows: 2. The starting position of SPT is determined by the starting position of downstream side (+66) and the starting position of downstream side (+21 ~+90). HepG2 cells were used in the analysis of the inverted repeat and CAT fragments (including the differential introduction analysis). The results showed that there was an inverted repeat arrangement in the field, and a C/EBP arrangement in the field, and an inverted repeat arrangement in the downstream. Inverted repeat alignment is combined with C/EBPα and C/EBPβ alignment. C/EBPα is the opposite of C/EBPβ. The activity of CAT increases and C/EBP α is the opposite of C/EBP β. The synthesis of SPT is carried out on the upstream side of the writing start position (+1), and the SPT fragment is carried out on the upstream side of the writing start position (+1), and the SPT fragment is carried out on the upstream side of the writing start position (+1). 14 ~+10, AP-2 recognition position alignment exists. The protein binding to AP-2β antibody is a key factor in the inhibition of protein binding to AP-2β. AP-2β is detected in the upper part of the brain, and the basal activity of AP-2 β is detected in the middle part of the brain. The Sp1 recognition position in a square,-125 ~-89 is arranged in the same way as the Sp1 recognition position. The difference between these parts is that the binding resistance and the activity of the upper part of the body are low. DNA-binding domain activation, Sp1 inactivation, over-activation, and low activity The wild Sp1 gene expression was enhanced by the increase of PKA(protein kinase A)-induced activity in the basal phase, and the effect was enhanced by the increase of CBP gene expression in the basal phase. CBP and ADENOVIRUS E 1A co-occurrence, resistance and damage