ラットセリンアミノ転移酵素遺伝子の下流側TATA-lessプロモータの解析

大鼠丝氨酸转氨酶基因下游 TATA-less 启动子分析

• 批准号: 07770079
• 负责人: 内田 千晴
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770079/
• 关键词: セリン:ピルビン酸アミノ基転移酵素; TATA-lessプロモータ; 転写因子

ラット肝臓セリン:ピルビン酸アミノ基転移酵素(SPT)の単一遺伝子上には2つの転写開始部位がある。2つのうち3'下流側の方から合成されたmRNAの翻訳産物はピルオキシソームに局在する(SPTp)。下流側転写開始部位近辺にはTATA-box,CAAT-box,GC-box等の基本プロモータ配列がなく,しかも既に報告されているTATA-less遺伝子群のプロモータ配列ともホモロジーがない。SPTp mRNA合成を支配するプロモータ領域に関して次の実験結果が得られた。1)上流側転写開始部位を+1とすると下流側転写開始部位は+65となる。Luciferase遺伝子をリポーター遺伝子としてHepG2細胞の系においてプロモータ領域を検索した結果,+63G→A,+67A→Tの変異により下流側からの転写活性が数分の1に低下する傾向が示された。2)ラット肝臓からの核抽出液および,肝癌細胞HepG2の核抽出液を用いてゲルシフト解析を行った。+21〜+89,+21〜75および+36〜+89の遺伝子断片をプローブとして用いたとき,特異的に形成されるシフトバンドが観察された。このシフトパターンはどのプローブを使ったときでも同じであった。3)+21〜+36の遺伝子断片は,+21〜+89あるいは+21〜75プローブと核抽出液との複合体形成を阻害しなかった。4)+21〜+89プローブと核抽出液との複合体形成は,次の遺伝子断片をプローブに対し300倍過剰量共存させても,ほとんど阻害されなかった:HIP1コンセンサス配列(いくつかのTATA配列を持たないハウスキーピング遺伝子のプロモータ領域に共通して存在する),およびCTF/NF1配列。+21〜+89の領域にはこれらに似た配列がある。また,予想通り,TATA配列によっても阻害を受けなかった。5)2〜4の結果はラット肝臓の核抽出液,HepG2細胞核抽出液のどちらを用いても同様であった。以上のことから,SPTp mRNAの合成には,少なくとも転写開始部位前後の数塩基配列が必要であること,これに関わる転写因子はHIP1,CTF/NF1,TBPではないことが明らかとなった。今後は,最近TATA-less遺伝子の発現調節に関与する転写因子として注目されているTFIII,USF等を考慮に入れながら,プロモータ配列の同定を進める予定である。

大鼠肝丝氨酸：丙酮酸氨基转移酶（SPT）具有两个转录起始位点。从两者下游的3'合成的mRNA的翻译产物定位于辉石分散体（SPTP）。在下游转录起始位点附近，没有基本的启动子序列，例如tata-box，caat-box和gc-box，并且与塔塔无基因组的启动子序列没有同源性。获得了有关SPTP mRNA合成的启动子区域的实验结果。 1）如果上游转录开始站点为+1，则下游转录起始站点为+65。荧光素酶基因被用作HEPG2细胞系统中启动子区域的报告基因， +63G→A和 +67A→T的突变显示出从下游侧至分数减少转录活性的趋势。 2）使用来自大鼠肝脏的核提取物和肝癌细胞HEPG2的核提取物进行凝胶移位分析。当使用基因片段 +21- +89， +21-75和 +36- +89用作探针时，观察到了特异性形成的移位带。任何探针都相同。 3） +21- +36基因片段没有抑制 +21- +89或 +21-75探针和核提取物之间的复合物的形成。 4）几乎不抑制 +21- +89探针和核提取物的复杂形成，即通过将300倍过量的以下基因片段与探针共存：HIP1共识序列（通常存在于没有多个TATA序列的家具基因的启动子区域中）和CTF/NF1序列。 +21至+89区域具有相似的数组。此外，正如预期的那样，它也没有被塔塔序列抑制。 5）结果2-4与使用大鼠肝脏的核提取物或HEPG2细胞的核提取物相似。从上面可以揭示出，在转录开始位点之前和之后，至少需要一些核苷酸序列才能合成SPTP mRNA，并且所涉及的转录因子不是HIP1，CTF/NF1或TBP。将来，我们计划通过考虑TFIII，USF等的启动子序列进行识别，这些启动子序列最近一直在引起人们的注意，因为转录因子与调节无TATA-tata-nose Gene表达的转录因子有关。