蛋白質安定化機能を持つ新規p27^<kip1>結合因子の癌化抑制への関与

具有蛋白质稳定功能的新型 p27^<kip1> 结合因子参与抑制癌症形成

• 批准号: 15024227
• 负责人: 内田 千晴
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15024227/
• 关键词: ユビキチン; プロテアソーム; p27; 細胞周期; E1A

[研究目的]CDK阻害タンパク質p27^<Kipl>(以下、p27と略)、真核生物の細胞周期抑制機構におけるキーファクターの1つとして重要視されてきた。p27の量あるいは機能の低下は、細胞周期進行の促進による細胞の異常な増殖を引き起こし、ひいては悪性癌形質獲得の要因となると考えられていた。したがってこのタンパク質の機能制御機構を明らかにすることは、癌細胞の悪性化形質形成の一因を知るために非常に重要である。我々はこの点に焦点をあて、p27の安定性制御に関わると予想される。2種の新規p27結合因子p27NBP1-2をクローニングした。本研究では、これら新規因子の細胞内機能の解析を通して、細胞の悪性化のメカニズムを解明することを目的とした。[方法と結果]p27NBP1はE3ユビキチンリガーゼであり、p27を基質とし、プロテアソーム依存的に不安定化することがin vivo assayで示された。酵母two-hybrid法によって、p27NBP1と結合する蛋白質p27ALIP、p27ARN等が同定された。p27NBP1はp27ALIPをユビキチン化して不安定化に導いたが、p27ARNの安定性に対しては影響を与えなかった。細胞の免疫染色法により、p27NBP1は単独では細胞内全体に、p27と共発現させると主に核に局在することが分かった。また、フローサイトメトリーで解析した結果、p27NBP1の発現は、S期で高い傾向を示した。以上の結果から、p27NBP1はS期におけるp27の分解制御に関わる新規のユビキチンリガーゼである可能性が示唆された。p27NBP2はE1A結合タンパク質であることが分かっており、E1Aはp27とp27NBP2との結合を阻害した。現在p27NBP2安定発現細胞株およびノックダウン細胞株を準備中であり、p27NBP2が細胞内在性p27の安定性、細胞周期、細胞増殖速度等に与える影響を調べる予定である。

[objective] CDK resistance against タ ン パ ク qualitative p27 ^ < Kipl > (hereinafter, p27 と is abbreviated), eukaryotes の cell cycle suppression institutions に お け る キ ー フ ァ ク タ ー の 1 つ と し て important visual さ れ て き た. Low amount of p27 の あ る い は function の は, cell cycle の promote に よ る abnormal cells の な raised colonization を lead き up こ し, ひ い て は 悪 carcinoma character get の by と な る と exam え ら れ て い た. し た が っ て こ の タ ン パ ク qualitative の function system of imperial institutions を Ming ら か に す る こ と は, cancer cells の 悪 taxiing mass formed の for を known る た め に very important で に あ る. I 々, 々, <s:1>, <s:1> point に, focus をあて, p27, <s:1>, stability control に, わると, want to される. Two new regulations p27 binding factors p27NBP1-2を ロ ニ ニ グ た た. This study で は, こ れ ら new rules factor analytical を の cell function の tong し て, cell の 悪 sexualising の メ カ ニ ズ ム を interpret す る こ と を purpose と し た. [method] と results p27NBP1 は E3 ユ ビ キ チ ン リ ガ ー ゼ で あ り, p27 を matrix と し, プ ロ テ ア ソ ー ム に unrest of interdependent す る こ と が in vivo assay で shown さ れ た. Yeast two-hybrid method によって, p27NBP1と binds する proteins p27ALIP, p27ARN, etc. が to された. P27NBP1 は p27ALIP を ユ ビ キ チ ン change し て not stabilization に guide い た が, p27ARN の stability に し seaborne て は influence を and え な か っ た. Cells の immune staining に よ り, p27NBP1 は 単 で alone all に は cell, p27 と 発 now total さ せ る と に nuclear に innings in す る こ と が points か っ た. ま た, フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー で parsing し た results, p27NBP1 の 発 は, S phase で high い tendency を shown し た. の above results か ら, p27NBP1 は S period に お け る p27 の decomposition suppression に masato わ る new rules の ユ ビ キ チ ン リ ガ ー ゼ で あ が る possibility in stopping さ れ た. P27NBP2 は E1A combining タ ン パ ク qualitative で あ る こ と が points か っ て お り, E1A は p27 と p27NBP2 と の combining を resistance against し た. Now p27NBP2 settle 発 now cell lines お よ び ノ ッ ク ダ ウ ン cell lines を prepared で あ り, p27NBP2 が cell inner p27 の stability, cell cycle, cell velocity etc に rights colonization and え る influence を adjustable べ る designated で あ る.

项目成果

Kimura, M.et al.: "Cell cycle-dependent regulation of the human aurora B promoter."Biochem.Biophys.Res.Com.. 316. 930-936 (2004)

Kimura, M.等人：“人类 aurora B 启动子的细胞周期依赖性调节。”Biochem.Biophys.Res.Com. 316. 930-936 (2004)

Fukasawa, H.et al.: "Treatment with anti-TGF-ss antibody ameliorates progressive nephritis by inhibiting Smad/TGF-ss signaling."Kidney Int.. 65. 63-74 (2004)

Fukasawa, H.et al.：“用抗 TGF-ss 抗体治疗通过抑制 Smad/TGF-ss 信号传导改善进行性肾炎。”Kidney Int.. 65. 63-74 (2004)

Hattori, T. et al.: "Cks1 is degraded via the ubiquitin-proteasome pathway in a cell cycle-dependent manner."Genes to Cells. 8. 889-896 (2003)

Hattori, T. 等人：“Cks1 通过泛素-蛋白酶体途径以细胞周期依赖性方式降解。”基因到细胞。