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GM2ガングリオシド蓄積症の遺伝子治療に関する基礎的研究

GM2神经节苷脂贮积症基因治疗基础研究

基本信息

批准号：
11770413
负责人：
山中正二
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

Sandhoff病マウスを用いプラスミドによる遺伝子治療を試みた。以下、概要を記す。1、発現プラスミドの作製;発現の高いプロモーターの検討を行った。CMV,CAGプロモーター下にHEXB遺伝子またはHEXA遺伝子を繋げてCOS7細胞に発現させ、hexosaminidase活性を調べた。その結果、CAGの方がCMVより約5倍の強い活性が見られた。2、in vivo gene ther apy;カチオン性脂質DMRIEC(GIBCO BRL)を用いCAG-HEXA及びCAG-HEXBを同時に尾静注し、主要臓器でのヘキソサミニダーゼA活性を導入後3日、5日、7日で測定した。導入後3日目で活性のピークを認め、脳以外の臓器(肺、心臓、腎臓、肝臓、脾臓)で10-34%の活性を認め、治療に必要とされる10%以上のレベルであった。更に肝臓で蓄積したGM2が分解していることを確かめるために、導入後の肝臓のガングリオシドの分解を導入後3日、7日で検討した。その結果、導入後3日ではGM2、GA2はそれぞれ約1割、5割代謝され、導入後7日では各6割、7割が代謝されていた。ガングリオシドの分解は酵素活性のピークより遅れて認められた。導入後7日のマウスの肝臓を抗GM2抗体を用いて染色したところ、ほぼ一様にGM2が分解され、無治療のコントロールに比べ染色性は低下していた。以上の結果よりプラスミドを用いた遺伝子治療は、中枢神経以外では酵素活性がある程度認められ、中枢神経系に異常のないタイプのライソゾーム病に対し、ある程度の期待が出来るのではないかと思われる。今後は更に反復投与や、胎児期治療による有効性を検討し、更に中枢神経への遺伝子導入法も検討していきたい。

The patients with Sandhoff disease were treated with the child therapy system. The following is a summary of the notes. 1. If you want to do something, you will do it. If you want to do it, you will have to do it. In CMV,CAG, the activity of hexosaminidase was detected in the cells of COS7 and HEXB. The activity of hexosaminidase was not detected. The results showed that the CMV activity of CAG prescription was about 5 times stronger than that of others. 2. In vivo gene ther apy; essential fatty acid DMRIEC (GIBCO BRL) was tested 3 days, 5 days and 7 days after the introduction of CAG-HEXA and CAG-HEXB at the same time. Three days after induction, the activity of the device (lung, heart, liver, spleen) was 10-34%, and the necessary treatment was more than 10%. Please make sure that your GM2 is broken down 3 days and 7 days after it is imported. The results showed that 3 days after introduction, the GM2 and GA2 cycles were about 1 cut, 5 cycles, 6 cycles and 7 weeks, respectively. The enzyme activity was broken down and the enzyme activity was broken down. Seven days after induction, the anti-GM2 antibodies in the liver were stained with DNA staining, GM2 was broken down, and no cure was found. The above results showed that the patients were treated with the drugs, the activity of enzymes outside the central nervous system was recognized, and the central nervous system was used to treat the disease. In the future, there will be more anti-investment and treatment in the period of pregnancy, and there will be sexual problems in the treatment of pregnancy.