遺伝子標的法によるヘキソサミニダーゼの腫瘍細胞における機能解析

利用基因打靶方法分析肿瘤细胞中氨基己糖苷酶的功能

• 批准号: 07770160
• 负责人: 山中 正二
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770160/
• 关键词: 遺伝子標的法; ヘキソサミニダーゼ; Tay-Sachs病; Sandhoff病

A)マウスメラノーマ細胞(B-16 F1)におけるヘキソサミニダーゼの役割を遺伝子標的法により検索することを目的とした。1)B-16 F1におけるヘキソサミニダーゼの発現を始めに調べた。ノーザンブロットによりヘキソサミニダーゼのαサブユニットおよびβサブユニットの発現をみた。マウス精巣ではαサブユニットが高く発現され、βサブユニットが低く発現していることが解っているが、これに較べB-16 F1細胞ではαサブユニットは精巣とほぼ同程度の発現をみた。しかし、βサブユニットの発現は精巣と較べても非常に低く、これらの結果よりヘキソサミニダーゼ(ββ)やヘキソサミニダーゼA(αβ)の活性は低くやヘキソサミニダーゼS(αα)の活性が高いことが予想された。現在、蛋白レベルでの酵素活性を検索中である。2)ターゲティングベクターの作製、サザーンブロットのためのプローブ作製は完了した。1)の結果からαサブユニットのターゲティングの方が面白いと思われる。B)一方、米国で作製したαサブユニットおよびβサブユニットの遺伝子破壊されたマウス(Tay-Sachs disease,Sandhoff disease mice)がヘテロの遺伝子型の形で送られてきたことにより、現在これらのマウスを交配してマウスの系を確立しようとしている所である。変異遺伝子の検出はPCRにより検出できるようになったため、簡便になった。科研費の一部はここにも使われた。

A) The target of the test is B-16 F1. 1) The B-16 F1 was launched with the help of a small team.ノーザンブロットによりヘキソサミニダーゼのαサブユニットおよびβサブユニットの発现をみた。The cell line B-16 F1 cells showed a high level of αThe activity of A(αβ) is low, and the activity of S(αα) is high. Now, the enzyme activity of protein is in the middle of the spectrum. 2) 1) The results of the study are as follows: B) A party, the United States and the United States to make a system of alpha The difference between PCR detection and PCR detection is simple and easy. A part of the scientific research fee is paid.