骨髄移植による骨髄幹細胞の臓器分布と経時的推移に関する研究-ヒトαガラクトシダーゼ発現トランスジェニックマウスを用いて-

前年の研究によってトランスジェニックマウスの骨髄におけるヒトαガラクトシダーゼは、幹細胞および造血細胞には発現がなく、骨髄の毛細血管内皮細胞に発現していることが確認された。幹細胞での発現がないことから骨髄移植によって、αガラクトシダーゼ発現細胞の増殖は望めないと考えられた。しかし、αガラクトシダーゼ陽性間葉系細胞(血管内皮細胞)が骨髄移植と同時に移植され、さらにその細胞が各臓器へ定着する可能性があることが予想される。そこで、骨髄移植後マウスにおけるヒトαガラクトシダーゼ発現細胞の臓器への定着および分布に関する検討を行った。ヒトαガラクトシダーゼトランスジェニックマウスより採集した骨髄の細胞を4.0×10^7個に調整し、放射線750radで前処理した6匹の正常マウスの尾静脈から注入した。放射線照射のみで骨髄移植を行わない4匹の正常のマウスはすべて死亡し、骨髄移植を行ったマウスは生存したことから、骨髄移植は成功したと考えられた。移植後3週、7週および12週後、それぞれマウス2匹ずつから肝臓、脾臓および骨髄を摘出した。各臓器はホルマリン固定パラフィン包埋を行いスライド標本を作製した。一次抗体としてヒトαガラクトシダーゼ抗体を使用し免疫組織化学をおこなった。その結果、陽性コントロールであるトランスジェニックマウスでは骨髄、肝臓および脾臓の毛細血管に陽性であったが、コントロールマウスおよび骨髄移植後のマウスのいずれの臓器においてもαガラクトシダーゼの検出はできなかった。そこで、さらに微量なRNAレベルでの発現が予想されることから、高感度検出系のRNA in situ hybridizationによる検討を現在行っており、移植後マウスの各臓器に関してのRNA発現を検討をする予定である。

前年の研究によってトランスジェニックマウスの骨髄におけるヒトαガラクトシダーゼは、幹細胞および造血細胞には発現がなく、骨髄の毛細血管内皮細胞に発現していることが確認された。幹細胞での発現がないことから骨髄移植によって、αガラクトシダーゼ発現細胞の増殖は望めないと考えられた。しかし、αガラクトシダーゼ陽性間葉系細胞(血管内皮細胞)が骨髄移植と同時に移植され、さらにその細胞が各臓器へ定着する可能性があることが予想される。そこで、骨髄移植後マウスにおけるヒトαガラクトシダーゼ発現細胞の臓器への定着および分布に関する検討を行った。ヒトαガラクトシダーゼトランスジェニックマウスより採集した骨髄の細胞を4.0×10^7個に調整し、放射線750radで前処理した6匹の正常マウスの尾静脈から注入した。放射線照射のみで骨髄移植を行わない4匹の正常のマウスはすべて死亡し、骨髄移植を行ったマウスは生存したことから、骨髄移植は成功したと考えられた。移植後3週、7週および12週後、それぞれマウス2匹ずつから肝臓、脾臓および骨髄を摘出した。各臓器はホルマリン固定パラフィン包埋を行いスライド標本を作製した。一次抗体としてヒトαガラクトシダーゼ抗体を使用し免疫組織化学をおこなった。その結果、陽性コントロールであるトランスジェニックマウスでは骨髄、肝臓および脾臓の毛細血管に陽性であったが、コントロールマウスおよび骨髄移植後のマウスのいずれの臓器においてもαガラクトシダーゼの検出はできなかった。そこで、さらに微量なRNAレベルでの発現が予想されることから、高感度検出系のRNA in situ hybridizationによる検討を現在行っており、移植後マウスの各臓器に関してのRNA発現を検討をする予定である。