SEREX法による頭頚部癌特異的抗原の検索

使用 SEREX 方法搜索头颈癌特异性抗原

• 批准号: 11770993
• 负责人: 西岡 信二
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770993/
• 关键词: 癌抗原; 頭頚部癌; SEREX; CT 抗原; CTL

1.材料の採取岡山大学医学部耳鼻咽喉科学教室で治療したの頭頚部癌の男性患者(舌扁平上皮癌 T4N2bM0:Stage IV)に対しインフォームドコンセントを取得し手術時に採取した腫瘍組織の一部を液体窒素で即時凍結した後マイナス80度で保存した。同時期に同患者の末梢血も採取し遠心分離した血清をマイナス20度にて保存した。2.cDNAライブラリーの作製凍結した腫瘍組織よりトータルRNAの抽出を行い、ポリAセレクションによりmRNAを得た。このmRNAを用いて作製したcDNAを大腸菌発現λ(ラムダ)ファージに組み込んだ8.1×10^5のcDNAライブラリーの作製に成功した。3.陽性クローンの同定とサブクローニングcDNAライブラリーラムダファージを大腸菌にトランスフェクトし腫瘍細胞由来タンパクを発現させこのタンパクをニトロセルロースメンブレンにトランスファーした。メンブレン上のタンパクと凍結保存していた癌患者希釈血清とのブロッティングを行い、ペルオキシダーゼ標識抗ヒトIgG抗体を用いて発色させ、陽性クローンの同定を行った。腫瘍組織へinfiltratingしているB細胞由来のIgGクローンは患者血清との反応の前にペルオキシダーゼ標識抗ヒトIgG抗体とメンブレンをあらかじめ反応させ発色させることにより除外した。本法をもちいて1stスクリーニング、2ndスクリーニング、3rdスクリーニングと行い最終的に5個の陽性クローンを得ることができた。

1. The materials were collected from the Department of Otorhinolaryngology, Department of Otorhinolaryngology, Luoshan University, Department of Otorhinolaryngology, Department of Medical Sciences, Department of Otorhinolaryngology, Department of Medical Sciences, Department of Otorhinolaryngology, Department of O At the same time, the peripheral blood samples of the same patients were separated from each other, and the serum samples were stored at 20 degrees Celsius. The 2.cDNA has been shown to have a negative impact on the organization. The RNA pull-out line has been extracted and the mRNA has been extracted. The mRNA was used to test the cDNA bacteria. The λ (epidemic) virus was detected. The cDNA was successful. 3. I don't know what to say. I don't know. I don't know. In order to save the cancer patients, the serum samples of cancer patients should be identified as anti-IgG antibodies with color, sex, etc. Tissue